Kit RT-qPCR directo III
Descrición do kit:
◮O kit RT-qPCR directo, que utiliza a transcriptase inversa Foreasy e a polimerasa de ADN Taq Foreasy HS desenvolvida por Foregene, cun tampón de reacción único, fai que este kit teña unha forte resistencia e compatibilidade, e pode probar directamente a reacción usando o sistema Foregene Lysis como modelo.Este kit pode solicitar o kit de detección de ácidos nucleicos COVID-19 e o desenvolvemento de kits de detección de ácidos nucleicos doutras bacterias patóxenas.
Descrición
O kit Direct RT-qPCR proporciona un tampón RT-qPCR empaquetado por separado (con ADN polimerase Foreasy HS Taq mesturado) e alta eficienciaTranscriptase inversa Foreasy (MMLV),o que é conveniente para a creación de kits de back-end e axuste do sistema, dentro dunha simple verificación.
O kit RT-qPCR directo, que utiliza a transcriptase inversa Foreasy e a polimerasa de ADN Taq Foreasy HS desenvolvida por Foregene, cun tampón de reacción único, fai que este kit teña unha forte resistencia e compatibilidade, e pode probar directamente a reacción usando o sistema Foregene Lysis como modelo.Este kit pode solicitar o kit de detección de ácidos nucleicos COVID-19 e o desenvolvemento de kits de detección de ácidos nucleicos doutras bacterias patóxenas.
Este kit pode ser directamente o compoñente do produto IVD, usando facilmente e rápido.Só necesita unha verificación sinxela, sen desenvolver de novo.
Especificacións
500T, 50.000T
Compoñentes do kit
| Contido do kit (Sistema de reacción 20 μL) | IM-05111-03 | IM-05112-03 |
| 500 T | 50.000 T | |
| Forasy Rtranscriptase inversa(200 U/μL) | 50 μl×1 | 1 ml× 5 |
| 2 × qPCR directaMix-Taqman | 1 ml × 5 | 500 ml×1 |
| Instrución | 1 | 1 |
Pasos Operativos
R: Preparar a plantilla e o reactivo
1. Prepare un modelo de ARN preparado (recoméndase utilizar o kit da serie Foregene Total RNA Isolation Kit para extraer e purificar o modelo de ARN) ou un produto de craqueo de mostras (recoméndase utilizar o sistema Foregene Lysis), cebadores específicos (10 μM) e outros consumibles relevantes, instrumento.
2. Coloque o tampón RT-qPCR directo 2×, ddH2O sen RNase e 20× Colorante de referencia ROX (se é necesario) na caixa con xeo, facendo que se derritan de forma natural e mestúranse suavemente.
B: Preparación do sistema RT-qPCR
Obter a metade do volume de tampón de reacción do sistema de reacción (por exemplo, se o volume do sistema é de 20 μL, necesitará 10 μL 2× Tampón RT-qPCR directo).). Paracantidade correspondente de encima, suxerímosloM-MLV: sistema de reacción 10-30 U/20 μL,TaqADN polimerase:Sistema de reacción 1-2 U/20 μLesta é a nosa suxestión, deberías probala e axustala), engade molde de ARN, cebadores e sondas específicos e engade ddH libre de RNase2O a 20 μl.A preparación específica do sistema de reacción RT-qPCR pode consultarse na seguinte táboa 1.
Táboa 1: Preparación do sistema RT-qPCR
| Compoñente | Volume | Concentración final |
| 2 × Tampón RT-qPCR directo | 10 μl | 1× |
| Transcriptase inversa Foreasy (MMLV) | 10-30 U | |
| Foreasy HS Taq ADN polimerase | 1-2 U | |
| Cebador directo (10 μM) | 0,8 μl | 50-900 nM |
| Cebador inverso (10 μM) | 0,8 μl | 50-900 nM |
| Sonda (4 μM) | 1 μl | 200 nM |
| Modelo (ARN ou lisado) | X μL | |
| 20 × tintura de referencia ROX | - | 1* |
| RNase-FreeddH2O | (6,4-X) μl | |
| Volume total | 20 μl |
Nota: o cebador directo e o cebador inverso son cebadores específicos do xene diana.O sistema da qPCR podería axustarse segundo modelos experimentais e PCR prácticos.Recomendamos 400 nM para a concentración final da maioría dos cebadores.Axuste o volume de cebadores e sondas específicos segundo a concentración preparada e a concentración final recomendada, por favor.
1*: Seleccione a concentración final adecuada de colorante de referencia ROX segundo os diferentes instrumentos de PCR cuantitativos.A concentración óptima de colorante de referencia ROX dos instrumentos de PCR cuantitativos comúns móstrase na seguinte táboa:
| Instrumentos de PCR cuantitativos | Concentración final de ROX Reference Dye |
| ABI PRISM 7000/7300/7700/7900HT/Step One,etc. | 1× (por exemplo, engade 1μl 20×ROX Reference Dye nun sistema de reacción de 20μl) |
| ABI 7500, 7500 Fast, Stratagene Mx3000P, Mx3005P e Mx4000, etc. | 0,5 × (por exemplo, engade 0,5 μl de colorante de referencia 20 × ROX nun sistema de reacción de 20 μl) |
| Instrumento Roche PCR, instrumento Bio-Rad PCR, instrumento Eppendorf PCR cuantitativo, etc. | Sen tintura de referencia ROX |
Almacenamento e vida útil
O kit debe almacenarse a -20 ± 5 ℃.Debe almacenarse inmediatamente nun frigorífico termostático a -20 ℃.O período de validez é de 2 anos se se almacena en condicións adecuadas.
