Kit de illamento de ARN total de plantas Kit de purificación de ARN total para plantas baixas en polisacáridos e polifenois
Especificacións
50 preparacións, 200 preparacións
O kit usa a columna de spin e a fórmula desenvolvidas por Foregene, que poden extraer de forma eficiente ARN total de alta pureza e alta calidade de varios tecidos vexetais con baixo contido de polisacáridos e polifenois.Para mostras de plantas con alto contido en polisacáridos ou polifenois, recoméndase utilizar Plant Total RNA Isolation Plus Kit para obter mellores resultados de extracción de ARN.O kit proporciona a columna de limpeza de ADN que pode eliminar facilmente o ADN xenómico do sobrenadante e do lisado de tecidos.A columna só de ARN pode unirse eficazmente ao ARN.O kit pode procesar un gran número de mostras ao mesmo tempo.
Todo o sistema non contén RNase, polo que o ARN purificado non se degradará.O tampón PRW1 e o tampón PRW2 poden garantir que o ARN obtido non estea contaminado por proteínas, ADN, ións e compostos orgánicos.
Compoñentes do kit
| Buffer PSL1, Buffer PS, Buffer PSL2 |
| Tampón PRW1, Tampón PRW2 |
| DdH libre de RNase2O, Columna de limpeza do ADN |
| Columna só ARN |
| Instrucións |
Características e vantaxes
■ Funcionamento a temperatura ambiente (15-25 ℃) durante todo o proceso, sen baño de xeo e centrifugación a baixa temperatura.
■ Kit completo sen RNase, non hai que preocuparse pola degradación do ARN.
■ A columna de limpeza do ADN únese especificamente ao ADN, polo que o kit pode eliminar a contaminación do ADN xenómico sen engadir DNase.
■ Alto rendemento de ARN: a columna só de ARN e a fórmula única poden purificar o ARN de forma eficiente.
■ Velocidade rápida: fácil de operar e pódese completar en 30 minutos.
■ Seguridade: non se precisa ningún reactivo orgánico.
■ Alta calidade: os fragmentos de ARN purificados son de gran pureza, están libres de proteínas e outras impurezas e poden satisfacer varias aplicacións experimentais posteriores.
Aplicación do kit
É axeitado para a extracción e purificación de ARN total de mostras de tecido vexetal fresco ou conxelado (especialmente tecido de follas vexetais frescas) con baixo contido en polisacáridos e polifenois.
Fluxo de traballo
Diagrama
Plant Total RNA Isolation Kit Plus procesou 50 mg de follas frescas de polisacáridos e polifenois e probouse mediante electroforese o 5% de ARN purificado.
1: plátano
2: Ginkgo
3: Algodón
4: Granada
Almacenamento e vida útil
O kit pódese almacenar durante 12 meses a temperatura ambiente (15-25 ℃) en ambiente seco e 2-8 ℃ durante máis tempo (24 meses).
O tampón PSL1 pódese almacenar a 4 ℃ durante 1 mes despois de engadir 2-hidroxi-1-etanetiol (opcional).
Guía de análise de problemas
A seguinte análise dos problemas que podes atoparPlanta totalRNA extraction will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.
A columna de rotación está obstruída
O bloqueo da columna de spin fará que o rendemento de ARN se reduza ou mesmo non poida ser purificado para obter ARN, e a calidade do ARN obtido será baixa.
Análise de causa común:
1. A mostra non está completamente rota.
A fragmentación incompleta da mostra pode bloquear a columna de limpeza do ADN, o que tamén pode afectar o rendemento e a calidade do ARN.Recomendamos que ao realizar a fragmentación da mostra, moa rapidamente en cantidades suficientes de nitróxeno líquido para romper os tecidos como as paredes celulares e as membranas celulares das mostras na medida do posible.Para mostras vexetais de polisacáridos polifenólicos, recomendámosche que utilices Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
2.Aspirar o sobrenadante illado da columna de limpeza de ADN, aspirar o posible sedimento de restos celulares.
O sedimento de restos celulares aspirados pode obstruír a columna só de ARN durante os procedementos de adsorción de ARN (consulte o paso 5 do procedemento, o paso 6 do procedemento de polifenol polisacárido).Recomendamos que se teña coidado ao aspirar este sobrenadante para evitar que se aspiren restos celulares.
3. A cantidade inicial de mostra é demasiado grande.
O uso excesivo da mostra producirá unha fragmentación incompleta da mostra ou unha lise incompleta das células por parte do Buffer PRL1 ou do Buffer PSL1, o que dará lugar a unha columna de purificación obstruída para as operacións de purificación.O kit de illamento de ARN total da planta ten un máximo inicial de 50 mg por purificación única dunha mostra operada.Para mostras vexetais de polisacáridos polifenólicos, recomendámosche que probes o Plant Total RNA Isolation Kit Plus.
4. A temperatura da centrífuga é demasiado baixa.
Illamento e purificación de ARN completo, excepto pola interrupción do nitróxeno líquido do tecido da mostra, todos os pasos realízanse a temperatura ambiente (20-25 °C).Algunhas centrífugas de baixa temperatura teñen temperaturas inferiores a 20 °C, o que pode causar bloqueos na columna de limpeza do ADN e/ou na columna só de ARN.Se isto ocorre, configure a temperatura da centrífuga a 20-25 °C e prequente a mestura de lise e/ou a adición de sobrenadante de separación de etanol a 37 °C.
Non se extraeu ARN ou o rendemento de ARN é baixo
Adoitan haber moitos factores que afectan á eficiencia da recuperación, tales como: contido de ARN da mostra, método de operación, volume de elución, etc.
Análise das causas comúns a continuación:
1. Durante a operación realizouse un baño de xeo ou centrifugación a baixa temperatura (4 °C).
Suxestión: Operar a temperatura ambiente (15-25 °C) en todo o proceso, non facer baño de xeo e centrifugación a baixa temperatura.
2.O ARN foi degradado debido á conservación inadecuada da mostra ou á conservación a longo prazo da mostra.
Recomendación: as mostras recén recollidas deben conxelarse rapidamente en nitróxeno líquido e, a continuación, almacenarse a -80 °C durante moito tempo, evitar a conxelación e desconxelación repetida das mostras;ou remolla inmediatamente as mostras en solución RNAlater de estabilizador de ARN (mostras animais).
3.A fragmentación e lise insuficientes da mostra conducen ao bloqueo da columna de purificación.
Suxestión: ao moer o tecido, asegúrate de que o tecido estea suficientemente moído e transfirao rapidamente ao tampón PSL1 previamente preparado (confirme que se engadiu a proporción correcta de β-ME, consulte o paso 1 do procedemento).
4.O eluyente engadiuse incorrectamente.
Suxestión: asegúrese de que o ddH Libre de RNase2O bótase no medio da membrana da columna de purificación.
5.Non se engadiu o volume correcto de etanol absoluto ao tampón PSL2 ou ao tampón PRW2.
Suxestión: siga as instrucións, engade o volume correcto de etanol absoluto ao tampón PSL2 e ao tampón PRW2 e mestura ben antes de usar o kit.
6.A cantidade de mostra de tecido é inadecuada.
Suxestión: Use 50 mg de tecido por 500 μl de Buffer PSL1.Usar demasiado tecido reducirá a cantidade de ARN extraído e tamén se reducirá a pureza do ARN resultante.Recomendamos encarecidamente que a dosificación inicial da mostra non supere os 50 mg por operación de extracción de ARN.
7. Volume de elución inadecuado ou elución incompleta.
Suxestión: o volume de eluyente da columna de purificación é de 50-200 μl;se o efecto de elución non é satisfactorio, recoméndase prolongar o tempo a temperatura ambiente despois de engadir ddH sen RNase precalentado.2O, como 5-10 min.
8.A columna de purificación ten residuos de etanol despois do lavado con buffer PRW2.
Suxestión: se o tubo baleiro se centrifuga durante 1 min e aínda queda etanol despois do lavado no tampón PRW2, pode aumentar o tempo de centrifugación do tubo baleiro a 2 min, ou colocar a columna de purificación a temperatura ambiente durante 5 min para eliminar completamente o etanol residual.
9.O kit utilizouse incorrectamente.
Suxestión: para mostras de plantas de polisacáridos polifenólicos, é posible que non se poidan obter mostras de ARN ideais utilizando kits comúns como o Kit de illamento de ARN total de plantas.Recomendamos que use Plant Total RNA IsolationKit Plus, que está especialmente deseñado para mostras de plantas de polisacáridos polifenólicos.Un kit especialmente desenvolvido para extraer ARN de mostras vexetais de polifenois e polisacáridos.
O valor OD260/OD280 é baixo
Elución de ARN con ddH2O e usado para lecturas do espectrofotómetro dá como resultado valores baixos de OD260/OD280.Recomendamos usar Tris-HCl 10 mM, pH 7,5 (en lugar de ddH libre de RNase2O para eluir ARN) para obter valores de OD260/OD280 relativamente correctos, consulte "Ensaios de concentración e purificación de ARN" na páxina 19.
O ARN purificado é degradado
A calidade do ARN purificado está relacionada con factores como a conservación da mostra, a contaminación da RNase e a manipulación.
Análise de causas comúns:
1.As mostras de tecido non se almacenaron a tempo despois da recollida.
Recomendación: se as mostras de tecidos non se usan a tempo despois da recollida, gárdaas inmediatamente en nitróxeno líquido a baixa temperatura ou transfiéraas a -80 °C para o seu almacenamento a longo prazo despois da conxelación rápida en nitróxeno líquido, ou mergulla inmediatamente as mostras na solución RNAlater estabilizadora de ARN (mostras animais).Para a extracción de ARN, intente utilizar mostras de tecido recén recollidas.
2.Conxelación e desconxelación repetidas de mostras de tecido.
Suxestión: ao almacenar mostras de tecido, o mellor é cortalas en anacos pequenos para a súa conservación, e sacar unha parte delas ao usalas para evitar a degradación do ARN provocada pola conxelación e desconxelación repetidas das mostras.
3.A RNase introdúcese no quirófano ou non se usan luvas desbotables, máscaras, etc.
Suxestión: os experimentos de extracción de ARN realízanse mellor en operacións de ARN separadas, e a mesa de laboratorio debe ser limpada antes do experimento e deben usarse luvas e máscaras desbotables durante o experimento para evitar a degradación do ARN causada pola introdución de RNase na maior medida.
4.O reactivo está contaminado pola RNase durante o seu uso.
Suxestión: Substitúao por unha nova serie de kits de extracción de ARN total de plantas para experimentos relacionados.
5.Os tubos de centrífuga e as puntas das pipetas utilizados para a manipulación do ARN están contaminados con RNase.
Suxestión: asegúrese de que os tubos de centrífuga, puntas de pipetas, pipetas, etc. utilizados na extracción de ARN estean todos libres de RNase.
Manuais de instrucións:
Manual de instrucións do kit de illamento de ARN total da planta
