Kit de illamento de ARN total animal Kits de extracción e purificación de ARN total para tecidos e células animais
Descrición do kit:
Extrae de forma rápida e eficiente ARN total de alta pureza e alta calidade de varios tecidos animais.
Non hai que preocuparse pola degradación do ARN.Todo o sistema está libre de RNase
Eliminar eficazmente o ADN usando a columna de limpeza do ADN
Elimina o ADN sen engadir DNase
Simple: todas as operacións realízanse a temperatura ambiente
Rápido: a operación pódese completar en 30 minutos
Seguro: non se usa ningún reactivo orgánico
Alta pureza: OD260/280≈1,8-2,1
Descricións dos kits
50 preparacións, 200 preparacións
Este kit usa ocolumna de rotación e fórmuladesenvolvido pola nosa empresa, que pode extraer ARN total de alta pureza e alta calidade de varios tecidos animais con alta eficiencia. Proporciona unha Columna de limpeza de ADN eficiente, que pode separar e adsorber facilmente o ADN xenómico do sobrenadante e do lisado de tecidos, sinxelo e que aforra tempo;A columna só de ARN pode unir o ARN de forma eficiente e pódese procesar simultaneamente cunha fórmula única Moitas mostras.
Todo o sistema está libre de RNase, polo que o ARN extraído non se degrada;Buffer RW1, Buffer RW2 sistema de lavado de tampón, para que o ARN obtido estea libre de contaminación por proteínas, ADN, ións e compostos orgánicos.
Compoñentes do kit
| Kit de illamento de ARN total animal | ||
| Compoñentes do kit | RE-03011 | RE-03014 |
| 50 T | 200 T | |
| Tampón RL1* | 25 ml | 100 ml |
| Tampón RL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buffer RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer RW2 | 24 ml | 96 ml |
| DdH2O libre de RNase | 10 ml | 40 ml |
| Columna só de ARN | 50 | 200 |
| Columna de limpeza do ADN | 50 | 200 |
| Manual de instrucións | 1 peza | 1 peza |
Información do produto
| Formato | Columna de xiro | Compoñente de purificación | Columna de xenes anteriores, reactivo |
| Fluxo | 1-24 mostras | Tempo por preparación | ~30 min (24 mostras) |
| Centrífuga | Centrífuga de mesa | Separación por pirólise | Separación centrífuga |
| Mostra | tecido animal;célula | Cantidade de mostras | Tecido: 10-20 mg;Cela: (1-5)×106 |
| Volume de elución | 50-200 μl | Volume máximo de carga | 850 μl |
Características e vantaxes
■ Non hai que preocuparse pola degradación do ARN;todo o sistema está libre de RNase
■ Eliminar eficazmente a columna de limpeza de ADN que usa ADN
■ Eliminar o ADN sen engadir ADNase
■ Simple: todas as operacións realízanse a temperatura ambiente
■ A operación rápida pódese completar en 30 minutos
■ Seguro: non se precisa ningún reactivo orgánico
■ Alta pureza -OD260/280≈1,8-2,1
Aplicación do kit
É axeitado para a extracción e purificación de ARN total dunha variedade de tecidos animais frescos ou conxelados ou células cultivadas.
Parámetros do produto
■ Aplicacións posteriores: síntese de ADNc da primeira cadea, RT-PCR, clonación molecular, Northern Blot, etc.
■ Mostras: tecidos animais, células cultivadas
■ Dosificación: tecidos 10-20 mg, células (2-5) × 106
■ Capacidade máxima de unión ao ADN da columna de purificación: 80 μg
■ Volume de elución: 50-200 μl
Diagrama
Kit de illamento de ARN total animal tratado 20 mg
Mostras frescas de rato, tomar 5% de ARN total purificado 1% de agar
Electroforese con glicogel
1: bazo 2: ril
3: Fígado 4: Corazón
Almacenamento e vida útil
O kit pódese almacenar durante 24 meses a temperatura ambiente (15-25 ℃) ou 2-8 ℃ durante máis tempo.O tampón RL1 pódese almacenar a 4 ℃ durante 1 mes despois de engadir β-mercaptoetanol (opcional).
Artigos citados
1.IF: 18.808:Zheng, Q., Qin, F., Luo, R., et al.Nanopartículas tipo lípido cargadas con ARNm para a edición de bases hepáticas mediante a optimización do deseño de compostos centrais.Adv.Función.Mater.2021, 31, 2011068.doi:10.1002/adfm.202011068.
2.IF: 18.187:He X, Hong W, Yang J, et al.A apoptose espontánea das células na preparación terapéutica de células nai exerce efectos inmunomoduladores mediante a liberación de fosfatidilserina.Obxectivo de transdución do sinal Ther.14 de xullo de 2021;6(1):270.doi: 10.1038/s41392-021-00688-z.
3.SE: 17,97:Dai Z, Liu H, Liao J, et al.A modificación do ARNt da N7-metilguanosina mellora a tradución do ARNm oncoxénico e promove a progresión do colangiocarcinoma intrahepático.Célula Mol.29 de xullo de 2021: S1097-2765(21)00555-4.doi: 10.1016/j.molcel.2021.07.003.
4.IF: 9.225:Cao X, Shu Y, Chen Y, et al.A modificación m6A mediada por Mettl14 facilita a rexeneración hepática mantendo a homeostase do retículo endoplasmático.Cell Mol Gastroenterol Hepatol.2021;12(2):633-651.doi: 10.1016/j.jcmgh.2021.04.001.
Kits de isoaltion de ARN para outras fontes de mostraestán dispoñibles:
Célula, vexetal, viral, sangue, etc.
Non se extrae ARN ou os rendementos de ARN son baixos
Moitas veces hai unha variedade de factores que afectan á eficiencia da recuperación, como: contido de ARN da mostra de tecido, método de operación, volume de elución, etc.
1. Durante a operación realizouse a centrifugación con baño de xeo ou crioxénica (4 °C).
Recomendación: Operar a temperatura ambiente (15-25 °C) durante todo o proceso, non bañarse con xeo e centrifugar a baixas temperaturas.
2. Conservación inadecuada da mostra ou tempo de almacenamento excesivo da mostra.
Recomendación: almacenar as mostras a -80 °C ou conxelar en nitróxeno líquido e evitar o uso repetido de conxelación e desconxelación;intente utilizar tecido fresco ou células cultivadas para a extracción de ARN.
3. Lise da mostra insuficiente.
Recomendación: ao homoxeneizar o tecido, asegúrese de que o tecido estea suficientemente homoxeneizado e de que as células do tecido estean suficientemente divididas para explicar a liberación de ARN.
4. O eluyente non se engade correctamente.
Recomendación: confirme que ddH libre de RNase2O O engádese gota a gota ao medio da membrana da columna de purificación.
5. Non se engadiu o volume correcto de etanol absoluto ao tampón RL2 ou ao tampón RW2.
Recomendación: Siga as instrucións, engada o volume correcto de etanol absoluto ao Buffer RL2 e ao Buffer RW2 e mestura ben antes de usar o kit.
6. A dosificación da mostra de tecido non é adecuada.
Recomendación: use 10-20 mg de tecido ou (1-5) × 106células por 500 μl de tampón RL1, xa que o uso excesivo de tecidos pode producir unha redución da extracción de ARN.
7. Volume de elución incorrecto ou elución incompleta.
Recomendación: o volume de elución da columna de purificación é de 50-200 μl;se o efecto de elución non é satisfactorio, recoméndase prolongar o tempo de colocación a temperatura ambiente despois de engadir ddH sen RNase precalentado.2O, por exemplo, durante 5-10 min.
8.A columna de purificación ten residuo de etanol despois do lavado do Buffer RW2.
Recomendación: se hai residuo de etanol despois do lavado do buffer RW2, centrifugación do tubo baleiro durante 1 min, o tempo para a operación de centrifugación do tubo baleiro pódese aumentar a 2 min, ou a columna de purificación pódese colocar a temperatura ambiente durante 5 min para eliminar adecuadamente o etanol residual.
O ARN purificado é degradado
A calidade do ARN purificado está relacionada con factores como a conservación da mostra, a contaminación da RNase e a manipulación, etc.
1. As mostras de tecido non se conservan a tempo.
Recomendación: se as mostras de tecidos ou células non se usan de xeito oportuno despois da recollida, criopreservar inmediatamente a -80 °C ou nitróxeno líquido.Para extraer ARN, use unha mostra de tecido ou célula recén tomada sempre que sexa posible.
2. Conxelación-desconxelación repetida de mostras de tecido.
Recomendación: ao almacenar mostras de tecido, o mellor é cortalas en anacos pequenos para a súa conservación, e retirar unha das pezas ao usalas para evitar a conxelación-desconxelación repetida da mostra e a degradación do ARN.
3. A RNase introdúcese ou non usando luvas desbotables, máscaras, etc. durante a operación.
Recomendación: os experimentos de extracción de ARN realízanse mellor en salas de manipulación de ARN separadas e a táboa límpase antes do experimento.
Use luvas e máscaras desbotables durante o experimento para minimizar a degradación do ARN causada pola introdución de RNase.
4. Os reactivos están contaminados con RNase durante o seu uso.
Recomendación: Substitúeo por un novo kit de illamento de ARN total animal para experimentos relacionados.
5. Os tubos de centrífuga, puntas, etc. empregados na manipulación do ARN están contaminados con RNase.
Recomendación: Confirme que os tubos de centrífuga, puntas, pipetas, etc. utilizados na extracción de ARN estean todos libres de RNase.
O ARN obtido purificado afecta aos experimentos posteriores
O ARN purificado pola columna de purificación, se os ións de sal, o contido de proteína é demasiado grande afectará o experimento posterior, como: transcrición inversa, Northern Blot et al.
1. O ARN eluído ten residuos de ións salinos.
Recomendación: confirmar que se engadiu o volume correcto de etanol ao tampón RW2 e realizar 2 lavados da columna de purificación á velocidade centrífuga indicada para o funcionamento;se hai algún residuo de ións de sal, deixe a columna de purificación no tampón RW2 durante 5 min a temperatura ambiente e realice a centrifugación para maximizar a eliminación da contaminación con sal.
2. Residuo de etanol no ARN eluído.
Recomendación: Confirme que despois do lavado do tampón RW2, realice a operación de centrifugación do tubo baleiro á velocidade de centrifugación indicada para o funcionamento, aumente o tempo da operación de centrifugación do tubo baleiro a 2 min se aínda quedan residuos de etanol ou déixao a temperatura ambiente durante 5 minutos despois da centrifugación do tubo baleiro para maximizar a eliminación de etanol.
