Kit de illamento de ARN total de células Kits de purificación de illamento de ARN total da célula
Descrición do kit:
Pódese obter ARN total altamente purificado e de alta calidade a partir de varias células cultivadas en 11 minutos.
Libre de RNase
Funciona a temperatura ambiente (15-25 ℃)
Con columna de limpeza de ADN
Alto rendemento de ARN
Rápido: remata a extracción en 11 minutos
Seguridade: Ningún químico orgánico
Descrición
Este kit usa a columna de spin e a fórmula desenvolvidas por Foregene, que poden extraer de forma eficiente ARN total de alta pureza e alta calidade de células cultivadas en placas de 96, 24, 12 e 6 pocillos.
O kit proporciona unha eficiente columna de limpeza de ADN, que pode separar facilmente o sobrenadante e o lisado celular, unir e eliminar o ADN xenómico.A operación é sinxela e aforra tempo.
TA columna só de ARN pode unir eficazmente o ARN cunha fórmula única.Pódese procesar un gran número de mostras simultaneamente.
Compoñentes do kit
| Composición do kit | RE-03111 | RE-03114 |
| 50 T | 200 T | |
| Buffer cRL1* | 25 ml | 100 ml |
| Tampón cRL2 | 15 ml | 60 ml |
| Buffer RW1* | 25 ml | 100 ml |
| Buffer RW2 | 24 ml | 96 ml |
| DdH2O libre de RNase | 10 ml | 40 ml |
| Columna só ARN | 50 | 200 |
| Columna de limpeza do ADN | 50 | 200 |
| Instrución | 1 | 1 |
*Por favor, use luvas e tome medidas de protección durante a operación xa que o Buffer cRL1 e o Buffer RW1 conteñen sales caotrópicas irritantes.
Características e vantaxes
■ Todo o proceso opera a temperatura ambiente (15-25 ℃), sen baño de xeo e centrifugación a baixa temperatura.
■ Todo o kit está libre de RNase, non hai que preocuparse pola degradación do ARN.
■ A columna de limpeza do ADN únese especificamente ao ADN, polo que o kit pode eliminar a contaminación do ADN xenómico sen engadir DNase adicional.
■ Alto rendemento de ARN: a columna só de ARN e a fórmula única poden purificar o ARN de forma eficiente.
■ Velocidade rápida: fácil de operar e pódese completar en 11 minutos.
■ Seguridade: non se precisa ningún reactivo orgánico.
■ Alta calidade: o ARN purificado é de gran pureza, libre de proteínas e outras impurezas e pode satisfacer diversos experimentos posteriores.
Aplicación do kit
É axeitado para a extracción e purificación do ARN total de células cultivadas en placas de 96, 24, 12 e 6 pocillos.
Fluxo de traballo
Diagrama
O diagrama da batería de xel de agarosa do Kit de illamento de ARN total de células tratou os diferentes números anteriores de células, 20 μl de elución en volume, 2 μl de ARN total purificado 1%.
Almacenamento e vida útil
O kit pódese almacenar durante 12 meses a temperatura ambiente (15-25 ℃) ou 2-8 ℃ durante máis tempo (24 meses).
O tampón cRL1 pódese almacenar a 4 ℃ durante 1 mes despois de engadir 2-hidroxi-1-etanetiol (opcional).
Non se extrae ARN ou os rendementos de ARN son baixos
Moitas veces hai unha variedade de factores que afectan á eficiencia da recuperación, como: contido de ARN da mostra de tecido, método de operación, volume de elución, etc.
1. Durante a operación realizouse a centrifugación con baño de xeo ou crioxénica (4 °C).
Recomendación: Operar a temperatura ambiente (15-25 °C) durante todo o proceso, non bañarse con xeo e centrifugar a baixas temperaturas.
2. Conservación inadecuada da mostra ou tempo de almacenamento excesivo da mostra.
Recomendación: almacenar as mostras a -80 °C ou conxelar en nitróxeno líquido e evitar o uso repetido de conxelación e desconxelación;intente utilizar tecido fresco ou células cultivadas para a extracción de ARN.
3. Lise da mostra insuficiente.
Recomendación: ao homoxeneizar o tecido, asegúrese de que o tecido estea suficientemente homoxeneizado e de que as células do tecido estean suficientemente divididas para explicar a liberación de ARN.
4. O eluyente non se engade correctamente.
Recomendación: confirme que ddH libre de RNase2O O engádese gota a gota ao medio da membrana da columna de purificación.
5. Non se engadiu o volume correcto de etanol absoluto ao tampón RL2 ou ao tampón RW2.
Recomendación: Siga as instrucións, engada o volume correcto de etanol absoluto ao Buffer RL2 e ao Buffer RW2 e mestura ben antes de usar o kit.
6. A dosificación da mostra de tecido non é adecuada.
Recomendación: use 10-20 mg de tecido ou (1-5) × 106células por 500 μl de tampón RL1, xa que o uso excesivo de tecidos pode producir unha redución da extracción de ARN.
7. Volume de elución incorrecto ou elución incompleta.
Recomendación: o volume de elución da columna de purificación é de 50-200 μl;se o efecto de elución non é satisfactorio, recoméndase prolongar o tempo de colocación a temperatura ambiente despois de engadir ddH sen RNase precalentado.2O, por exemplo, durante 5-10 min.
8.A columna de purificación ten residuo de etanol despois do lavado do Buffer RW2.
Recomendación: se hai residuo de etanol despois do lavado do buffer RW2, centrifugación do tubo baleiro durante 1 min, o tempo para a operación de centrifugación do tubo baleiro pódese aumentar a 2 min, ou a columna de purificación pódese colocar a temperatura ambiente durante 5 min para eliminar adecuadamente o etanol residual.
O ARN purificado é degradado
A calidade do ARN purificado está relacionada con factores como a conservación da mostra, a contaminación da RNase e a manipulación, etc.
1. As mostras de tecido non se conservan a tempo.
Recomendación: se as mostras de tecidos ou células non se usan de xeito oportuno despois da recollida, criopreservar inmediatamente a -80 °C ou nitróxeno líquido.Para extraer ARN, use unha mostra de tecido ou célula recén tomada sempre que sexa posible.
2. Conxelación-desconxelación repetida de mostras de tecido.
Recomendación: ao almacenar mostras de tecido, o mellor é cortalas en anacos pequenos para a súa conservación, e retirar unha das pezas ao usalas para evitar a conxelación-desconxelación repetida da mostra e a degradación do ARN.
3. A RNase introdúcese ou non usando luvas desbotables, máscaras, etc. durante a operación.
Recomendación: os experimentos de extracción de ARN realízanse mellor en salas de manipulación de ARN separadas e a táboa límpase antes do experimento.
Use luvas e máscaras desbotables durante o experimento para minimizar a degradación do ARN causada pola introdución de RNase.
4. Os reactivos están contaminados con RNase durante o seu uso.
Recomendación: Substitúeo por un novo kit de illamento de ARN total animal para experimentos relacionados.
5. Os tubos de centrífuga, puntas, etc. empregados na manipulación do ARN están contaminados con RNase.
Recomendación: Confirme que os tubos de centrífuga, puntas, pipetas, etc. utilizados na extracción de ARN estean todos libres de RNase.
O ARN obtido purificado afecta aos experimentos posteriores
O ARN purificado pola columna de purificación, se os ións de sal, o contido de proteína é demasiado grande afectará o experimento posterior, como: transcrición inversa, Northern Blot et al.
1. O ARN eluído ten residuos de ións salinos.
Recomendación: confirmar que se engadiu o volume correcto de etanol ao tampón RW2 e realizar 2 lavados da columna de purificación á velocidade centrífuga indicada para o funcionamento;se hai algún residuo de ións de sal, deixe a columna de purificación no tampón RW2 durante 5 min a temperatura ambiente e realice a centrifugación para maximizar a eliminación da contaminación con sal.
2. Residuo de etanol no ARN eluído.
Recomendación: Confirme que despois do lavado do tampón RW2, realice a operación de centrifugación do tubo baleiro á velocidade de centrifugación indicada para a operación, aumente o tempo da operación de centrifugación do tubo baleiro a 2 min se aínda quedan residuos de etanol ou déixao a temperatura ambiente durante 5 m.
