Kit QuickEasy Cell Direct RT-qPCR (96 pocillos) - Taqman
Descricións
O(96 pozos) QuickEasyTM Kit Cell Direct RT-qPCR–Taqmanofreceun sistema tampón de lise únicoto liberar rapidamente ARNa partir de células cultivadasmostras para reaccións de RT-qPCR, eliminando o laborioso e lentoproceso de purificación de ARN, e só leva 7 minutos obter o modelo de ARN necesario.O5 × Direct RT Mixe2 × Direct qPCR Mix-SYBRproporcionado na caixa pode rapidamente eobter efectivamente cuantitativos en tempo realResultados da PCR.
5× Direct RT Mix e 2× Direct qPCR Mix-Taqman teñen unha forte tolerancia aos inhibidores e poden usar o lisado da mostra que se vai probar como modelo para unha transcrición inversa eficiente e unha amplificación específica.O reactivo contén transcriptase inversa única de Foregene con alta afinidade polo ARN, así como ADN polimerase Hot D-Taq, dNTPs, MgCl2 , tampón de reacción, optimizador e estabilizador de PCR , e pódese usar xunto co tampón de lise para detectar a mostra de forma rápida, sinxela e precisa, e ten as características de alta sensibilidade, forte especificidade e boa estabilidade.
O kit está dirixido á lise de microsistemas de células cultivadas en 96 pozos, e ten unha boa uniformidade e consistencia;os compoñentes do kit proporcionan 96 reaccións de lise, 96 reaccións de transcrición inversa e 96 × 2 reaccións qPCR, que poden satisfacer a placa de células de 96 pozos para un uso único, evitando a contaminación causada pola apertura, conxelación e desconxelación repetidas dos reactivos e a degradación do rendemento dos reactivos.
Compoñentes do kit
| Composición do kit ( 50 μSistema de lise L/20 μlRT sistema de reacción /20μSistema de reacción L qPCR) | DRT-03021 | Observación | |
| 96T | |||
| ParteI | TampónCL | 5 ml | CélulaLise |
| ForexeneProtease Plus II | 100 μL | ||
| TampónST | 500 μL | ||
| Parte II | ADNBorrador | 100 μL | |
| 5 × Direct RT Mix | 400 μL | RT | |
| 2 × mestura directa de qPCR-Taqman | 1 mL × 2 | qPCR | |
| 50 × tintura de referencia ROX | 400µl | ||
| RNase- LibreddH2 O | 1,7 ml |
| |
| Manual | 1 peza | 1 porción | |
*: O borrador de ADN do reactivo de lise inclúese na Parte II do kit;Os compoñentes de lise celular, RT e qPCR pódense mercar por separado.
Características e vantaxes
■Simple e eficaz: coa tecnoloxía Cell Direct RT, pódense obter mostras de ARN en só 7 minutos.
■ A demanda de mostra é pequena, só se poden probar 10 celas.
■ Alto rendemento: pode detectar rapidamente ARN en células cultivadas en placas de 384, 96, 24, 12 e 6 pocillos.
■ O borrador de ADN pode eliminar rapidamente os xenomas liberados, reducindo moito o impacto nos resultados experimentais posteriores.
■ O sistema optimizado de RT e qPCR fai que a transcrición inversa RT-PCR en dous pasos sexa máis eficiente e a PCR máis específica e máis resistente aos inhibidores da reacción RT-qPCR.
Aplicación do kit
Ámbito de aplicación: células cultivadas.
- ARN liberado pola lise da mostra: só aplicable ao modelo de RT-qPCR deste kit.
- O kit pódese utilizar para os seguintes fins: análise da expresión xénica, verificación do efecto silenciador de xenes mediado por ARNsi, cribado de fármacos, etc.
Almacenamento e vida útil
A parte I deste kit debe almacenarse en 4℃;A parte II debe almacenarse a -20 ℃.
Foregene Protease Plus II debe almacenarse a 4℃, non conxelar a -20 ℃.
Reactivo 2×Direct qPCR Mix-Taqman debe almacenarse a -20℃na escuridade;se se usa con frecuencia, tamén se pode almacenar en 4℃ para almacenamento a curto prazo (usar dentro de 10 días).
Principios de deseño de imprimacións de PCR en tempo real
Imprimación directa e imprimación inversa
Para a PCR en tempo real, o deseño do cebador é moi importante.Os cebadores están relacionados coa especificidade e a eficiencia da amplificación por PCR e pódense deseñar con referencia aos seguintes principios:
- Lonxitude de imprimación: 18-30 bp.
- Contido de GC: 40-60%.
- Valor Tm: o software de deseño de imprimación, como Primer 5, pode dar o valor Tm da imprimación.Os valores de Tm dos cebadores augas arriba e augas abaixo deberían ser o máis próximos posible.Tamén se pode utilizar a fórmula de cálculo de Tm: Tm = 4 °C (G + C) + 2 °C (A + T).Cando se realiza a PCR, xeralmente se selecciona unha temperatura por debaixo do valor Tm do cebador de 5 °C como temperatura de recocido (o aumento correspondente na temperatura de recocido pode aumentar a especificidade da reacción de PCR).
- Cebadores e produtos de PCR:
- A lonxitude do produto de amplificación da PCR do cebador de deseño é preferiblemente 100-150 pb.
- Os imprimadores de deseño na zona estrutural secundaria da plantilla deben evitarse na medida do posible.
- Evitar a formación de 2 ou máis bases complementarias entre os extremos 3′ dos cebadores augas arriba e augas abaixo.
- A base terminal de cebador 3′ non pode estar presente con 3 G ou C consecutivos adicionais.
- Os cebadores en si non poden ter estruturas complementarias, se non, formarase unha estrutura de horquilla, que afectará á amplificación da PCR.
- O ATCG debe distribuírse o máis uniformemente posible na secuencia do cebador e debe evitarse a base terminal 3′ como T.
Apéndice1: Cell DirectoRT-qPCR Compoñente do kitpaquete de suplementos t
1. Solución de lise celular
| Solución de lise celular | |||
| Compoñentes do kit (sistema de lise de 24 pozos/pozo) | DRT-01011-A1 | DRT-01011-A2 | |
| 100 T | 500 T | ||
| Parteeu | Tampón CL | 20 ml | 100 ml |
| Foregene Protease Plus II | 400 μl | 1 ml × 2 | |
| Tampón ST | 1 ml × 2 | 10 ml | |
| ParteII | Borrador de ADN | 400 μl | 1 ml × 2 |
| RT Mix | |
| Compoñentes do kit (sistema de reacción 20 μl) | DRT-01011-B1 |
| 200 T | |
| 5 × Direct RT Mix | 800 μl |
| DdH libre de RNase2O | 1,7 ml × 2 |
| Mestura de qPCR | ||
| Compoñentes do kit (sistema de reacción 20 μl) | DRT-01021-C1 | DRT-01021-C2 |
| 200 T | 1000 T | |
| 2× directo qPCR Mix-Taqman | 1 ml × 2 | 1,7 ml × 6 |
| 20 × tintura de referencia ROX | 40 μl | 200 μl |
| DdH libre de RNase2O | 1,7 ml | 10 ml |
Manuais de instrucións:
