Kit de aislamiento de ADN de hisopo bucal/tarjeta FTA Kit de extracción o purificación de ADN xenómico a partir de hisopos bucales
Descrición do kit:
Purifique rapidamente o ADN xenómico de alta calidade a partir de mostras de cotonete bucal/tarxeta FTA.
◮Sen contaminación por RNase:A columna de ADN só proporcionada polo kit permite eliminar o ARN do ADN xenómico sen engadir RNase durante o experimento, evitando que o laboratorio sexa contaminado por RNase esóxena.
◮Velocidade rápida:Foregene Protease ten unha actividade máis alta que proteases similares, e dixire as mostras de tecido rapidamente;a operación é sinxela e a operación de extracción de ADN xenómico pódese completar en 20-80 minutos.
◮Conveniente:A centrifugación realízase a temperatura ambiente e non hai necesidade de centrifugación a baixa temperatura a 4 °C nin precipitación de ADN con etanol.
◮Seguridade:Non é necesaria a extracción de reactivos orgánicos.
◮Alta calidade:O ADN xenómico extraído ten fragmentos grandes, sen ARN, sen RNase e un contido de ións extremadamente baixo, que pode cumprir os requisitos de varios experimentos.
◮Sistema de microelución:Pode aumentar a concentración de ADN xenómico, o que é conveniente para a detección ou o experimento posterior.
Descrición
Este kit proporciona un método eficiente e rápido para obter ADN xenómico de alta concentración a partir de hisopos bucais e FTA Card (manchas de sangue).Usando a nosa empresa'A única columna e fórmula de rotación da membrana de sílice só con ADN, combinada con Foregene Protease, pódese extraer ADN xenómico de alta concentración e de alta calidade en 80 minutos.A pequena columna de purificación especialmente deseñada únese ao ADN xenómico e o ADN pódese eluír cunha pequena cantidade (15μl) sistema de elución para aumentar a concentración do ADN xenómico obtido, o que é conveniente para a detección ou o experimento posterior.O kit pode procesar unha ou máis mostras á vez, e o proceso de purificación non require extracción de substancias orgánicas como fenol, cloroformo e isopropanol ou precipitación de etanol que consumen moito tempo, e a operación é sinxela e aforra tempo.
Especificacións
50 preparacións
Compoñentes do kit
| Tampón ST1 |
| Tampón ST2 |
| Acrilamida lineal |
| Buffer PW |
| Buffer WB |
| Tampón EB |
| Protease de xenes anteriores |
| Columna só de ADN |
| Instrucións |
Características e vantaxes
-Sen contaminación por RNase: a columna de ADN só proporcionada polo kit permite eliminar ARN do ADN xenómico sen engadir RNase durante o experimento, evitando que o laboratorio estea contaminado por RNase esóxena.
-Velocidade rápida: a protease Foregene ten maior actividade que as proteasas similares, dixire as mostras rapidamente;operación sinxela.
-Conveniente: a centrifugación realízase a temperatura ambiente, e non hai necesidade de centrifugación a baixa temperatura a 4°C nin precipitación de ADN con etanol.
-Seguridade: Non se precisa extracción de reactivo orgánico.
-Alta calidade: o ADN xenómico extraído ten fragmentos grandes, sen ARN, sen RNase e un contido de ións extremadamente baixo, que pode cumprir os requisitos de varios experimentos.
-Sistema de micro-elución: pode aumentar a concentración de ADN xenómico, o que é conveniente para a detección ou o experimento posterior.
Aplicación do kit
É adecuado para a purificación de ADN xenómico a partir das seguintes mostras: hisopos bucais, tarxeta FTA (manchas de sangue).
Almacenamento e vida útil
-Este kit pódese almacenar durante 12 meses en condicións secas a temperatura ambiente (15-25°C);se é necesario almacenar durante un período máis longo, pódese almacenar a 2-8 °C.
Nota: se se almacena a baixa temperatura, a solución é propensa á precipitación.Antes do uso, asegúrese de colocar a solución no kit a temperatura ambiente durante un período de tempo.Se é necesario, prequentao nun baño maría a 37 °C durante 10 minutos para disolver o precipitado e mestúrao antes de utilizalo.
-A solución de Protease Foregene ten unha fórmula única, que é activa cando se almacena a temperatura ambiente durante moito tempo (3 meses);a súa actividade e estabilidade será mellor cando se almacena a 4°C, polo que se recomenda almacenalo a 4°C, lembrar non mantelo a -20°C.
A columna de purificación está obstruída
Neste kit, na operación de extracción de ADN xenómico, a columna de purificación adórbese directamente na mestura de lise enzimática da mostra sen etapa de centrifugación e a columna de purificación pode bloquearse debido á enzima incompleta e á alta viscosidade da mostra.
As seguintes causas posibles son as seguintes:
1. Dixestión enzimática incompleta de mostras de tecido.
Recomendación: o tempo de procesamento da mostra da Protease Foregene pódese ampliar adecuadamente ou o sobrenadante pódese tomar despois da centrifugación a 12.000 rpm (~13.400 × g) durante 5 min.
2. Uso excesivo de mostras de tecidos ou grandes tecidos.
Recomendación: é mellor non exceder 1 cotonete bucal na mostra;se a mostra é demasiado grande, aumente a dosificación de Buffer ST1, Foregene Protease, tampón ST2 en consecuencia.
3. A viscosidade da mostra é demasiado alta.
Recomendación: as mostras pódense diluír adecuadamente con 10 mM de Tris-HCl antes da extracción do ADN xenómico.
4. Succionáronse fragmentos da tarxeta de sangue.
Recomendación: o tempo de centrifugación transitoria do paso 6 da extracción xenómica de manchas de sangue (tarxeta FTA) pódese ampliar adecuadamente.
Baixo rendemento ou sen ADN
Moitas veces hai unha variedade de factores que afectan o rendemento do ADN xenómico, incluíndo a orixe da mostra, as condicións de almacenamento da mostra, a preparación da mostra, a manipulación, etc.
Non se pode obter ADN xenómico durante a extracción
As posibles causas son as seguintes:
1. A conservación inadecuada das mostras ou o almacenamento durante demasiado tempo conduce á degradación do ADN xenómico.
Recomendación: os hisopos orais deben ser tomados de preferencia recentemente, e non é recomendable o uso de hisopos conservados para as operacións de extracción de ADN xenómico;As mostras de manchas de sangue deben garantir que a calidade sexa cualificada e que o tempo de almacenamento non sexa demasiado longo.
2. O uso de tecido moi reducido pode provocar que non se extraiga o ADN xenómico correspondente.
Recomendación: siga as instrucións de mostraxe do cotonete bucal da guía de operación e limpe tantas veces como sexa posible para que se poidan unir ao cotonete bucal suficientes células para a extracción de ADN xenómico;para a extracción de mostras de manchas de sangue, a área de corte de manchas de sangue pódese aumentar adecuadamente.
3. A protease do xene anterior consérvase de forma incorrecta, o que provoca unha diminución da súa actividade ou a súa inactivación.
Recomendación: Confirme as condicións de almacenamento da Protease Foregene ou substitúea por unha nova Protease Foregene para a reacción enzimática.
4. A conservación inadecuada do kit ou o tempo de almacenamento é demasiado longo, o que provoca o fallo dalgúns compoñentes do kit.
Recomendación: adquira un novo kit de illamento de ADN con hisopo bucal para procedementos relacionados.
5. O tampón WB non engade etanol absoluto.
Recomendación: Confirme que o tampón WB engade o volume correcto de etanol absoluto.
6. O eluyente non se engade correctamente á película de silicona.
Recomendación: Engade gotas de eluyente prequentado a 65 °C ao medio da membrana de silicona e déixase a temperatura ambiente durante 5 minutos para aumentar a eficiencia de elución.
ADN xenómico illado de baixo rendemento
As seguintes causas posibles son as seguintes:
1. A conservación inadecuada das mostras ou o almacenamento durante demasiado tempo conduce á degradación do ADN xenómico.
Recomendación: os hisopos orais son preferiblemente mostrados recentemente, e os hisopos conservados non se deben usar para a extracción de ADN xenómico.
2. Se a cantidade de mostra de tecido é demasiado pequena, o contido de ADN xenómico extraído será menor.
Recomendación: siga as instrucións de toma de mostras de cotonete oral da guía de operación, limpando tantas veces como sexa posible para que se poidan unir ao cotonete o coiro suficiente para a extracción de ADN xenómico.
3. A protease do xene anterior consérvase de forma incorrecta, o que provoca unha diminución da súa actividade ou a súa inactivación.
Recomendación: Confirme as condicións de almacenamento da Protease Foregene ou substitúea por unha nova Protease Foregene para a reacción enzimática.
4. Problemas de eluentes.
Recomendación: utilizar tampón EB para a elución;se usa ddH2O ou outros eluentes, confirme que o pH do eluato está entre 7,0-8,5.
5. O eluato non se engade correctamente gota a gota.
Recomendación: Engadir gotas de eluyente ao medio da membrana de silicona e deixar a temperatura ambiente durante 5 minutos para aumentar a eficiencia de elución.
6. O líquido de elución acumúlase demasiado pouco.
Recomendación: Use o eluyente para a elución do ADN xenómico tal e como se require nas instrucións, polo menos non menos de 15 μl.
Baixa pureza do ADN xenómico illado
A baixa pureza do ADN xenómico pode provocar un fracaso ou resultados insatisfactorios dos experimentos posteriores, como: as encimas non se poden abrir, a PCR non pode obter o fragmento xenético de interese, etc.
As posibles causas son as seguintes:
1. Contaminación por heteroproteínas, contaminación por ARN.
Análise: a columna de purificación non se lavou usando Buffer PW;a columna de purificación de lavado Buffer PW non se lavou usando a velocidade centrífuga correcta.
Recomendación: Asegúrese de que non haxa precipitación no sobrenadante antes de engadir etanol;asegúrese de lavar a columna de purificación segundo as instrucións e non se pode omitir este paso.
2. Contaminación por ións impuros.
Análise: Omitiuse a columna de purificación de lavado de tampón WB ou lavouse só unha vez, o que provocou contaminación iónica residual.
Recomendación: asegúrate de lavar o Buffer WB 2 veces segundo se indica para eliminar o máximo posible os ións residuais.
3. Contaminación por encimas de ARN.
Análise: engadíronse RNases estranxeiras ao tampón;A operación de lavado do tampón PW foi incorrecta, o que deu lugar a residuos de RNase, que afectaron as operacións experimentais de ARN posteriores, como a transcrición in vitro.
Recomendación: os kits de illamento de ácidos nucleicos da serie Foregene poden eliminar ARN sen adición adicional de RNase, polo que o kit de illamento de ADN de tarxeta de hisopo bucal/FTA non precisa engadir RNase;asegúrese de seguir as instrucións para a columna de purificación de lavado Buffer PW, e este paso non se pode omitir.
4. Residuo de etanol.
Análise: o tampón WB non realizou a centrifugación en tubo baleiro despois de lavar a columna de purificación.
Recomendación: Realice a correcta operación de centrifugación en tubo baleiro segundo as instrucións.
5. Outra contaminación por impurezas.
Análise: as mostras gardadas ou as mostras especiais non se tratan previamente.
Recomendación: pretratar a mostra a fondo segundo se indica.
