A baixa relación de A260/A230 adoita ser causada por impurezas cunha lonxitude de onda de absorción máxima de 230 nm.Vexamos que inclúen estas impurezas:

• Contaminantes comúns	Lonxitude de onda de absorción	Efecto ratio
  Proteína	~230 nm e 280 nm	Redución simultánea de A260/A 280e A260/A 280ratios
  Sal de guanidina	220-240 nm	Reducir o A260/A 280proporción
  Fenol	~270 nm	-
  Trizol	~230 nm e 270 nm	Reducir o A260/A 280proporción
  EDTA	~230 nm	Reducir o A260/A 280proporción
  Etanol	230-240 nm	Reducir o A260/A 280proporción

 
 
 
Lonxitude de onda de absorción e valor de contraste de contaminantes comúns

Pcontaminación por proteínas
A contaminación por proteínas pode considerarse como a contaminación máis común no proceso de extracción de ácidos nucleicos.A proteína existe entre a fase acuosa superior e a inferiororgánicofase.A contaminación reducirá a relación de A260/A280 e A260/A230 ao mesmo tempo, e a relación de A260/A230 cambiará de forma máis evidente que a relación de A260/A280.
Durante a posteriortranscrición inversaor Reaccións de qPCR, Os residuos proteicos poden inhibir ou interferir coa función enzimática.A mellor forma de evitar a contaminación por proteínas é ter presente o principio de "bastante menos que máis, unha pequena cantidade moitas veces" ao aspirar o sobrenadante.

2. Contaminación por guanidinio
o clorhidrato (GuHCl) e o tiocianato de guanidina (GTC) teñen o efecto de desnaturalizar as proteínas, que poden destruír rapidamente as membranas celulares durante o proceso de extracción do ácido nucleico, provocando a desnaturalización e precipitación das proteínas.A lonxitude de onda de absorción de GuHCl e GTC está entre 220-240 nm, eO sal de guanidinio residual reducirá a proporción de A260/A230.Aínda que o sal de guanidinio residual reducirá a proporción,o impacto nos experimentos posteriores é realmente insignificante.

3. Contaminación por trizol
O compoñente principal do Trizol é o fenol.A función principal do fenol é lisar as células e liberar proteínas e ácidos nucleicos nas células.Aínda que o fenol pode desnaturalizar eficazmente as proteínas, non pode inhibir completamente a actividade da RNase.Polo tanto, engádense a TRIzol 8-hidroxiquinolina, isotiocianato de guanidina, β-mercaptoetanol, etc. para inhibir a RNase endóxena e esóxena.
Ao extraer ARN celular, Trizol pode lisar rapidamente as células e inhibir a nuclease liberada polas células, e o Trizol residual reducirá significativamente a proporción de A260/A230.
Método de procesamento: ao centrifugar, hai que ter en conta que o fenol en Trizol é facilmente soluble na fase acuosa baixo a condición de 4 ° e temperatura ambiente.

4. Residuo de etanol
O etanol úsase no proceso final para precipitar o ADN mentres disolve os ións de sal que poden unirse ao ADN.A lonxitude de onda de absorción da máis altapico de absorción deetanol tamén está a 230-240 nm, o quetamén reducirá a relación de A260/A230.
O método de evitar residuos de etanol pódese repetir dúas veces durante a elución final, soplando nocampana extractoradurante dous minutos para permitir que o etanol se evapore completamente antes de engadir tampón para a elución.
Non obstante, debe saberse que a relación é só un índice de avaliación da calidade do ARN.Se as operacións mencionadas anteriormente están estrictamente reguladas, a desviación entre a relación e o rango estándar non terá un gran impacto nos experimentos posteriores.
Produtos relacionados:
Kit de illamento de ARN total animal
Kit de illamento de ARN total da planta
Kit de illamento de ARN total celular
Kit de illamento de ARN total de plantas Plus