Preguntas frecuentes paraKit de illamento de ARN total animal

A seguinte análise dos problemas que podes atoparextracción de ARN de tecido animal/célula will help you with your experiments. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali : Tech@foregene.com.

Non se extrae ARN ou os rendementos de ARN son baixos

Moitas veces hai unha variedade de factores que afectan á eficiencia da recuperación, como: contido de ARN da mostra de tecido, método de operación, volume de elución, etc.

1. Durante a operación realizouse a centrifugación con baño de xeo ou crioxénica (4 °C).

Recomendación: Operar a temperatura ambiente (15-25 °C) durante todo o proceso, non bañarse con xeo e centrifugar a baixas temperaturas.

2. Conservación inadecuada da mostra ou tempo de almacenamento excesivo da mostra.

Recomendación: almacenar as mostras a -80 °C ou conxelar en nitróxeno líquido e evitar o uso repetido de conxelación e desconxelación;intente utilizar tecido fresco ou células cultivadas para a extracción de ARN.

3. Lise da mostra insuficiente.

Recomendación: ao homoxeneizar o tecido, asegúrese de que o tecido estea suficientemente homoxeneizado e de que as células do tecido estean suficientemente divididas para explicar a liberación de ARN.

4. O eluyente non se engade correctamente.

Recomendación: confirme que ddH libre de RNase₂O O engádese gota a gota ao medio da membrana da columna de purificación.

5. Non se engadiu o volume correcto de etanol absoluto ao tampón RL2 ou ao tampón RW2.

Recomendación: Siga as instrucións, engada o volume correcto de etanol absoluto ao Buffer RL2 e ao Buffer RW2 e mestura ben antes de usar o kit.

6. A dosificación da mostra de tecido non é adecuada.

Recomendación: use 10-20 mg de tecido ou (1-5) × 10⁶células por 500 μl de tampón RL1, xa que o uso excesivo de tecidos pode producir unha redución da extracción de ARN.

7. Volume de elución incorrecto ou elución incompleta.

Recomendación: o volume de elución da columna de purificación é de 50-200 μl;se o efecto de elución non é satisfactorio, recoméndase prolongar o tempo de colocación a temperatura ambiente despois de engadir ddH sen RNase precalentado.₂O, por exemplo, durante 5-10 min.

8.A columna de purificación ten residuo de etanol despois do lavado do Buffer RW2.

Recomendación: se hai residuo de etanol despois do lavado do buffer RW2, centrifugación do tubo baleiro durante 1 min, o tempo para a operación de centrifugación do tubo baleiro pódese aumentar a 2 min, ou a columna de purificación pódese colocar a temperatura ambiente durante 5 min para eliminar adecuadamente o etanol residual.

O ARN purificado é degradado

A calidade do ARN purificado está relacionada con factores como a conservación da mostra, a contaminación da RNase e a manipulación, etc.

1. As mostras de tecido non se conservan a tempo.

Recomendación: se as mostras de tecidos ou células non se usan de xeito oportuno despois da recollida, criopreservar inmediatamente a -80 °C ou nitróxeno líquido.Para extraer ARN, use unha mostra de tecido ou célula recén tomada sempre que sexa posible.

2. Conxelación-desconxelación repetida de mostras de tecido.

Recomendación: ao almacenar mostras de tecido, o mellor é cortalas en anacos pequenos para a súa conservación, e retirar unha das pezas ao usalas para evitar a conxelación-desconxelación repetida da mostra e a degradación do ARN.

3. A RNase introdúcese ou non usando luvas desbotables, máscaras, etc. durante a operación.

Recomendación: os experimentos de extracción de ARN realízanse mellor en salas de manipulación de ARN separadas e a táboa límpase antes do experimento.

Use luvas e máscaras desbotables durante o experimento para minimizar a degradación do ARN causada pola introdución de RNase.

4. Os reactivos están contaminados con RNase durante o seu uso.

Recomendación: Substitúeo por un novo kit de illamento de ARN total animal para experimentos relacionados.

5. Os tubos de centrífuga, puntas, etc. empregados na manipulación do ARN están contaminados con RNase.

Recomendación: Confirme que os tubos de centrífuga, puntas, pipetas, etc. utilizados na extracción de ARN estean todos libres de RNase.

O ARN obtido purificado afecta aos experimentos posteriores

O ARN purificado pola columna de purificación, se os ións de sal, o contido de proteína é demasiado grande afectará o experimento posterior, como: transcrición inversa, Northern Blot et al.

1. O ARN eluído ten residuos de ións salinos.

Recomendación: confirmar que se engadiu o volume correcto de etanol ao tampón RW2 e realizar 2 lavados da columna de purificación á velocidade centrífuga indicada para o funcionamento;se hai algún residuo de ións de sal, deixe a columna de purificación no tampón RW2 durante 5 min a temperatura ambiente e realice a centrifugación para maximizar a eliminación da contaminación con sal.

2. Residuo de etanol no ARN eluído.

Recomendación: Confirme que despois do lavado do tampón RW2, realice a operación de centrifugación do tubo baleiro á velocidade de centrifugación indicada para o funcionamento, aumente o tempo da operación de centrifugación do tubo baleiro a 2 min se aínda quedan residuos de etanol ou déixao a temperatura ambiente durante 5 minutos despois da centrifugación do tubo baleiro para maximizar a eliminación de etanol.

Illamento de tipos de mostras de ácido ulceico

Os kits de illamento de ARN de Foregene poden obter o illamento/extracción total de ARN das seguintes fontes de mostra: tecido animal, vexetais, células, virus, sangue, etc.

Como gardo o kit

Almacenamento a temperatura ambiente durante 24 meses.