Consellos para mellorar a recuperación de cola

1. Aumenta a carga da mostra durante a electroforese.

2. Use tampón de electroforese recén preparado.

3. Ao cortar cola, intente cortar só a cola con tiras para reducir o volume de corte de cola: non necesita cola con poucos fragmentos de propósito, se non, afectará a taxa de recuperación.

4. Despois de fundir dúas ou máis pezas de cola, utiliza un tubo por grande que sexa o volume e transfórmao á mesma columna.

5. A solución engadida no sol pode ser un pouco máis, o que é máis propicio para a unión do ADN á membrana, pero xeralmente non supera os 750 ul.

6. A clave para a recuperación do xel é unir o ADN á columna mediante a concentración de sal, a acidez (carga) e a hidrofobicidade da solución na columna.Polo tanto, se o pH do tampón de electroforese é demasiado alto, pódense engadir 10 ul (pH 5,0, 3 mol/L NaAC) ao sol;para interceptar mellor as moléculas de ADN na membrana, pódese engadir isopropanol ao 30% para quentar o líquido despois de disolver a cola.

7. Antes de engadir o eluyente, déixase a columna a temperatura ambiente uns minutos (uns 10 minutos) para que se evapore completamente o etanol.

8. Finalmente, engade menos eluyente para minimizar o volume de recuperación.Xeralmente, úsanse 30-50μl de eluyente para a elución (non moi pouco, se non, non poderá mollar a membrana, o que non é propicio para a elución);as gotas de elución están no centro da membrana, para eluír completamente o ADN unido á membrana.

9. Despois de engadir o eluyente, pódese eluír nun baño de auga de 55 graos durante 5 minutos ou colocarse nun baño de auga de 50 graos durante máis de 10 minutos, ou selado cun parafilm a 4 graos durante a noite, e despois centrifugar para a súa recuperación ao día seguinte, o efecto é bo.

10.Engadir o eluato centrifugado de novo á columna de adsorción e centrifugar de novo.

Métodos e procedementos detallados para a recuperación de produtos da PCR

1. Reciclaxe ordinaria de caucho

Se queres recuperar a cola, o mellor é utilizar un kit, que é conveniente e ten unha taxa de recuperación lixeiramente superior.Se realmente necesitas recuperalo manualmente, podes engadir 3 veces o volume de TE despois de cortar a cola.Despois de fundir nun baño de auga, o fenol, o fenol/cloroformo extráense limpamente e o etanol precísase.Iso é.

2. Recuperación de ADN a partir de xeles de baixo punto de fusión

Purificación de fragmentos de ADN Engadir TE (10 mmol/l Tris-HCl pH8,0, 0,1 mmol/l EDTA) igual ao volume do xel, e colocar nun baño de auga a 65 °C durante 5 minutos para disolver o xel por completo.

Despois de levar a temperatura ambiente, engadiuse unha cantidade igual de fenol (saturado con TE, TE selou na capa superior e eliminouse a capa inferior de fenol) e mesturouse suavemente a mestura (non precisa mestura) e centrifugouse a 12.000 rpm durante 3 minutos.Repita 1-2 veces.

Toma o sobrenadante, engade 0,1 volume de acetato de sodio 3mol/L (pH 5,2) e 2,5 veces o volume de etanol absoluto para levar a cabo a precipitación de etanol.Disolver o ADN purificado cunha cantidade axeitada de TE, medir o contido e preparar para o seu uso (pódese usar para a análise da estrutura do xene diana, a preparación de sondas, etc.).

3. Recuperación da PCR cunha boa especificidade de amplificación

Se a especificidade da amplificación da PCR é boa, é só unha simple purificación e recuperación do produto da PCR.Podes engadir 50 ug/ml de proteinase K ao produto da PCR, 37 graos durante 1 h, extraer unha vez con fenol/cloroformo, extraer unha vez con cloroformo e engadir 0,1 volume de sobrenadante.O acetato de sodio foi recuperado por precipitación con 2,5 volumes de etanol absoluto.

Produtos relacionados:

https://www.foreivd.com/pcr-purification-kit-2-product/

https://www.foreivd.com/blood-superdirecttm-pcr-kit-edta-product/