Os métodos de PCR e a contaminación por aerosois de ácidos nucleicos nos laboratorios de probas de ácidos nucleicos son como as dúas caras dunha moeda.Só podemos escoller telo ou non, pero non podemos elixir se o queremos ou gastalo.

1. Cribado do removedor de ADN

Para conseguir a eliminación espacial da contaminación por aerosois de ácidos nucleicos, primeiro é necesario filtrar os removedores de ADN que poden eliminar os ácidos nucleicos en estado líquido.Porque non hai moitos removedores de ADN que realmente funcionen.Para o método experimental, consulte: removedor de ADN non pode ser un "recuncho secreto" do laboratorio!

Neste experimento mesturáronse 100 copias/μL (CT aproximadamente 31) do plásmido de ASFV e do eliminador de ADN cuantificados mediante PCR dixital en volumes iguais e despois reaccionaron a temperatura ambiente durante 10 min, 20 min e 30 min respectivamente.Despois da extracción do ácido nucleico, realizouse a amplificación de qPCR.Comparouse un control positivo mesturado con plásmido e auga.Dado que o experimento non se completou ao mesmo tempo, pode haber unha certa desviación entre os resultados, pero non afecta a conclusión do experimento.Ata agora, avalei 10 produtos comerciais de eliminación de ADN.Só os produtos no 1, no 6 e no 8 poden degradar eficazmente o ADN plasmídico en estado líquido.Outros produtos case non teñen efecto.

Táboa 1 Efecto de eliminación de ácidos nucleicos do removedor de ADN dispoñible comercialmente

2. O experimento do efecto de eliminación de ADN dos desinfectantes de uso común

1. Cribado de desinfectantes de uso habitual

Existen moitos tipos de desinfectantes de uso habitual nos laboratorios: aldehídos, fenois, alcohois, sales de amonio cuaternario, peróxidos, preparados de cloro e ácidos e bases.Os efectos de desinfección destes desinfectantes sobre microorganismos foron completamente verificados mediante experimentos, pero non hai suficientes datos experimentais sobre o efecto de degradación dos ácidos nucleicos.Os laboratorios de probas de ácidos nucleicos necesitan un desinfectante que non só teña un bo efecto de desinfección sobre os microorganismos, senón que tamén poida degradar o ADN.Os resultados das probas mostran que só dúas preparacións de cloro de 84 desinfectantes e ácido tricloroisocianúrico e ácido clorhídrico 1 M cumpren os requisitos.Dado que o ácido clorhídrico 1 M é altamente corrosivo, recoméndase que os preparados de cloro se utilicen como eliminación de residuos nos laboratorios de probas de ácidos nucleicos.Non obstante, os preparados de cloro son corrosivos para os metais e non se poden utilizar para a desinfección de instrumentos e equipos.

Táboa 2 Efectos da eliminación de ADN dos distintos tipos de desinfectantes

2. A concentración efectiva mínima de preparados de cloro

Os desinfectantes a base de cloro teñen un forte efecto de degradación do ADN, pero debido á súa corrosión e irritación do metal, pódense usar para limpar o chan, encimeras non metálicas, puntas de remollo, tubos de centrífuga e outros elementos de proba.

Segundo as "Novas directrices técnicas de desinfección epidémica de pneumonía coronaria": Contaminantes (sangue, secrecións e vómitos dos pacientes) cloro dispoñible 5g/L-10g/L desinfectante que contén cloro;pisos, paredes e superficies dos obxectos usan cloro dispoñible 1 g/L desinfectante con cloro: a roupa, a roupa de cama e outros téxtiles son primeiro empapado nun desinfectante con cloro con 0,5 g/L de cloro dispoñible durante 30 minutos, e despois límpanse como de costume.

Táboa 3 Efecto de eliminación de ADN de diferentes concentracións de desinfectante de cloro

Os resultados da proba mostran que: cando a concentración efectiva de cloro é maior ou igual a 1,2 g/L, o desinfectante que contén cloro pode degradar completamente 100 copias/μL de plásmido cando se usa durante 5 minutos.Cando se actúa durante 10 minutos, o desinfectante 84 cunha concentración efectiva de cloro superior ou igual a 0,6 g/L pode degradar completamente 100 copias/μL de plásmidos.

3. Experimento de eliminación de aire contaminado por aerosol de ácido nucleico

Como limpar o aire contaminado polos aerosois de ácidos nucleicos?A maioría dos pensamentos son crear un ambiente contaminado con aerosois e despois limpalo, ou limpar os ácidos nucleicos despois da contaminación.Para min, un experimento que non se pode repetir e os resultados do experimento non se poden analizar cuantitativamente carece de sentido, polo que tomei prestados algúns métodos de desinfección do aire desinfectante.Consulte "GB27948-2020 Requisitos xerais para desinfectantes de aire" e "Especificacións técnicas de desinfección"

1. Materiais de proba

1.1 Eliminador de ADN: neste experimento, seleccionáronse dous removedores de ADN dispoñibles comercialmente 6 e 8 da táboa 1.

1.2 Plásmido de proba: tendo en conta que o valor CT da maior parte da contaminación do laboratorio será superior a 30, a concentración do plásmido do xene ASFV empregado nesta ocasión é de aproximadamente 100 copias/μL e a PCR cuantitativa fluorescente CT é de aproximadamente 31,07.Engade o plásmido ao cotonete de algodón e seque ao aire.

1.3 Instrumento de proba: o instrumento de desinfección Bilingkehan KVBOX, amablemente apoiado por Shenzhen Runlian Environmental Technology Co., Ltd., ten un excelente rendemento de desinfección do aire con desinfectante de peróxido de hidróxeno e pode matar eficazmente as esporas e outros microorganismos.

1.4 Espazo de proba: unha ventá de transferencia pechada duns 0,1 metros cúbicos.

2. Método de proba

A cantidade de desinfectante establecida na máquina de desinfección é de 10 ml e a concentración é de 100 ml/m3, o que é moito maior que "GB27948-2020 Requisitos xerais para desinfectantes de aire": cando se usa desinfectante con aerosol, a cantidade de desinfectante debe ser ≤10 ml/m3.