Hai pouco descubrín algo incrible!Moitos profesionais experimentais avanzados ao seu redor nin sequera coñecen algúns puntos de coñecemento experimentais moi básicos.

Por exemplo, podes responder as seguintes preguntas?

Hai algunha diferenza entre OD260 e A260?Que significa cada un?
OD é a abreviatura de densidade óptica (densidade óptica), A é a abreviatura de absorbancia (absorbancia), os dous conceptos son en realidade iguais, "densidade óptica" é "absorbancia", pero "densidade óptica" está en liña coa maioría dos estándares nacionais e está máis estandarizada.

Normalmente medimos o valor de DO a 260 nm para calcular a concentración de ácido nucleico, entón que representa 1OD?
O ácido nucleico ten un pico de absorción máximo a unha lonxitude de onda de 260 nm, que contén tanto ADN como ARN, así como fragmentos de ácido nucleico fragmentados (este é o punto clave).
O valor OD medido a unha lonxitude de onda de 260 nm rexistrouse como OD260.Se a mostra é pura, o valor OD260 pode calcular a concentración da mostra de ácido nucleico.
1 DO260=50 μg/ml dsDNA (ADN de dobre cadea)
= 37 μg/ml de ADN ss (ADN monocatenario)
=40 μg/ml de ARN
= 30 μg/ml dNTPs (oligonucleótidos)
Hai algunha conexión e diferenza entre RT-PCR, Realtime-PCR e QPCR?
RT-PCR é a abreviatura de Reverse Transcription PCR
Real Time PCR=qPCR, abreviatura de Quantitative Real Time PCR
Aínda que a PCR en tempo real (PCR cuantitativa fluorescente en tempo real) e a PCR de transcrición inversa (PCR de transcrición inversa) parecen abreviarse como RT-PCR.Pero a convención internacional é: RT-PCR refírese especificamente á PCR de transcrición inversa.

Cales son os nt, pb e kb usados ​​habitualmente para describir a lonxitude do ADN/ARN en bioloxía?
nt = nucleótido
bp = par de bases par de bases
kb = quilobase

Por suposto, dirías que a moita xente non lle importan estes pequenos detalles!Todo o mundo fai isto, e ninguén che preguntará que é.Sabes que isto é innecesario, non?

Non, Non, Non, é moi necesario saber isto!por que?
Porque queres publicar un artigo!Irmán!Tanto se pretendes graduarte como se persegues logros de investigación científica, debes confiar nos artigos para falar!

A extracción de ácidos nucleicos debería ser o experimento máis sinxelo e básico.A calidade da extracción do ácido nucleico determina directamente os resultados dos experimentos posteriores.

Aínda que o dixen moitas veces, aínda hai moitos amigos aos que non lles importa.Esta vez decidín saír do artigo!

Información mínima para a publicación de experimentos cuantitativos de PCR en tempo real, denominados MIQE, é un conxunto de directrices de experimentos cuantitativos de fluorescencia lanzadas a nivel internacional, que propón estándares mínimos para a información experimental necesaria para avaliar experimentos de PCR cuantitativas de fluorescencia e publicar artigos.Mediante as condicións experimentais e os métodos de análise proporcionados polo experimentador, os revisores poden avaliar mellor a validez do esquema experimental do investigador.

Pódese observar que no apartado de extracción de ácidos nucleicos propuxéronse os seguintes elementos de detección:

"E" indica a información que se debe proporcionar e "D" indica a información que debe proporcionarse se é necesario.

A forma é moi complicada, de feito, quero dicir que todo o mundo ten que comezar

pureza (D), rendemento (D), integridade (E) e consistencia (E) para avaliar os ácidos nucleicos nestes catro aspectos.

Segundo os hábitos experimentais, primeiro falar sobre os métodos de avaliación de pureza e concentración.

A medición do DO é o método de detección favorito e máis sinxelo para os experimentadores.En canto ao principio, non vou entrar en detalles aquí.Moitos laboratorios usan agora espectrofotómetros ultramicro para analizar directamente cuantitativamente mostras de ácidos nucleicos.Mentres amosa o valor de absorbancia, o programa dá directamente o valor de concentración (ácido nucleico, proteína e colorante fluorescente) e as relacións relacionadas.En canto á análise do valor OD, garda esta imaxe e estarás ben.

Lista de solucións de valor OD universal

Non obstante, hai algunhas advertencias que deben presentarse por separado.

(Despois de todo, sei que debes ser ti os que aforras e esperas ata que os necesites!)

Nota 1 Equipos

O valor OD verase afectado por diferentes equipos.Mentres o OD260 estea dentro dun determinado intervalo, os valores de OD230 e OD280 son significativos.Por exemplo, o rango de absorbancia do Eppendorf D30 común a 260 nm é de 0 ~ 3 A e o NanoDrop One de Thermo está a 260 nm.Rango de absorbancia de 0,5 ~ 62,5 A.

Nota 2Reactivo de dilución

O valor de DO pode verse afectado pola dilución de diferentes reactivos.Por exemplo, a lectura OD260/280 do ARN purificado en pH7,5 10 mm Triso buffer está entre 1,9 e 2,1, mentres que ensolución acuosa neutraa relación será menor, quizais só 1,8-2,0, pero isto non significa que a calidade do ARN cambie Diferenza.

Nota 3Substancias residuais

A existencia de substancias residuais afectará á precisión da medición da concentración de ácidos nucleicos, polo que é necesario evitar na medida do posible os residuos de proteínas, fenols, polisacáridos e polifenois nas mostras de ácidos nucleicos.

Non obstante, de feito, a extracción con reactivos orgánicos é un método antigo.Nos kits comerciais, o efecto de extracción pódese conseguir mediante unha columna de adsorción a base de sílice combinada coa centrifugación, evitando reactivos orgánicos tóxicos e nocivos de difícil eliminación, etc. O problema, comoO kit de extracción de ácidos nucleicos de Foregene, non usa DNase/RNase e reactivos orgánicos tóxicos durante toda a operación, rápido e seguro, e oefecto ébo(Dixo accidentalmente que era calvo, pero sei que queres saber).

Exemplo 1: Rendemento e pureza da extracción de ADN xenómico

O kit de illamento de ADN do solo Foregene (DE-05511) trata mostras de solo de varias fontes, e a cantidade e pureza do ADN xenómico obtido móstranse na seguinte táboa:
Exemplo 2: Rendemento e pureza da extracción do ARN do tecido

O kit de illamento de ARN total animal (RE-03012) procesou varias mostras de tecido, e a cantidade e pureza do ARN obtido móstranse na seguinte táboa (para tecido de rato):
Non obstante, non penses que rematou co valor OD.Tes algún coidar os puntos clave que debuxei para ti na fronte?

Aviso

Tamén se calcularán na absorbancia as moléculas de ácido nucleico fragmentadas.Asumindo que tes residuos de ADN xenómico no ARN, o teu valor OD parecerá moi alto, pero non se pode determinar a concentración real de ARN.Se o teu ARN é Non está claro se hai degradación, polo que aínda necesitamos un método de avaliación completo para dar un xuízo máis preciso, é dicir, a avaliación da integridade do ácido nucleico mencionada no MIQE.