As probas de laboratorio comezan coa recollida de mostras, e a recollida de mostras é a máis fácil de pasar por alto.O máis importante para a recollida de mostras é seleccionar o tipo de mostra correcto, utilizar ferramentas de mostraxe adecuadas e levar a cabo un transporte e procesamento razoables.

I.Tipo de mostra

Os tipos de mostra comúns son os seguintes:

O método de mostraxe pode facer referencia ás especificacións técnicas para a vixilancia ambiental do novo coronavirus no mercado de comercio agrícola (bazar)”:

1. Mostras de hisopos de cotonetes de garganta, mans, roupa e outros obxectos dos practicantes: é necesario usar a solución de preservación do virus no tubo de mostraxe do virus e infiltrarse completamente nos cotonetes de mostraxe.A superficie do chan) aplícase repetidamente e enxágüe máis de 3 veces.Ao mesmo tempo, é necesario realizar unha mostraxe distribuída multipunto na superficie do obxecto mostrado.

2. Mostras de hisopos de superficie de alimentos: as mostras de alimentos non se poden recoller directamente.Os alimentos que se van recoller deben separarse coidadosamente e almacenarse nunha bolsa de mostraxe limpa antes de recoller as mostras de cotonete.Requírese utilizar a solución de preservación do virus no tubo de mostraxe do virus, despois de empapar por completo o cotonete de mostraxe, para untar e lavar repetidamente a superficie da mostra de alimentos que se recollerá máis de 3 veces.Ao mesmo tempo, é necesario realizar unha mostraxe distribuída multipunto na superficie da mostra.

3. Mostras de sumidoiros: segundo a distribución do sistema de drenaxe no mercado, seleccione 2-3 lugares de mostraxe de sumidoiros, centrándose na recollida da rede de tubaxes internas, augas abaixo da dirección do fluxo de auga ou a conexión coa rede de tubaxes municipal.Para recoller unha mostra de cotonete, mergúllaa no sumidoiro cun cotonete de mostraxe para que adsorba as augas fecais e enxágüea no tubo de mostraxe máis de 3 veces.Para recoller mostras de augas residuais, use botellas de plástico de polietileno para recoller mostras de augas residuais de 30-500 ml;para a recollida de augas residuais cun volume superior a 500 ml, pódense utilizar baldes de plástico de polietileno ou equipos especiais de enriquecemento para mostras de auga no lugar.Ao mesmo tempo, é necesario realizar mostraxes distribuídas en varios puntos para o lugar de mostraxe de augas residuais.

4. Mostras de animais: para os animais vivos pódense utilizar cotonetes de mostraxe para recoller cotonetes da superficie corporal, cotonetes orofarínxeos e anales e tamén se poden recoller e rexistrar mostras de excrementos ou secrecións na folla de rexistro.Para as mostras de animais que foron sometidas a desollado, etc., use hisopos de algodón para recoller mostras da súa superficie corporal e da cavidade corporal.É necesario utilizar a solución de preservación do virus no tubo de mostraxe de virus para infiltrarse completamente no hisopo de algodón de mostraxe e, a continuación, repetir a aplicación da superficie da mostra de alimentos que se vai recoller.Shabu máis de 3 veces.Ao mesmo tempo, é necesario realizar unha mostraxe distribuída multipunto na superficie da mostra.

5. Outros aparellos: contedores para o transporte e a cría de animais como gaiolas ou peceras.En primeiro lugar, observa ou comprende os tipos específicos de animais almacenados e criados no recipiente e recolle mostras de cotonete na parede interior do recipiente ou mostras líquidas do contido.

6.Recollida de mostras de aerosois en áreas onde se reúne a xente, áreas comerciais locais mal ventiladas, oficinas e cuartos de descanso.

II.Ferramentas de mostraxe
1. Tubo de recollida de sangue
Se necesitas facer probas de ácidos nucleicos e mostras de anticoagulantes máis tarde, recoméndase utilizar un vaso sanguíneo ao baleiro que conteña anticoagulante EDTA para recoller sangue;para as mostras de soro, recoméndase utilizar un vaso sanguíneo ao baleiro sen anticoagulante.

2. Cotonete de mostraxe

Recoméndase utilizar hisopos de polipropileno en lugar de hisopos de alxinato cálcico ou hisopos con postes de madeira, porque poden conter substancias que inactivan certos virus e inhiben as probas de PCR.Non se poden usar hisopos con cabezas de algodón, porque as fibras de algodón teñen unha forte adsorción de proteínas e non se eluyen facilmente na solución de conservación posterior.

Nas "Especificacións técnicas para a recollida e detección mixtas 10 en 1 de ácidos nucleicos novos de coronavirus", establécese claramente que "o cotonete de mostraxe debe estar feito de poliéster, nailon e outros materiais que non sexan de algodón e de alxinato de calcio, e o mango debe estar feito de material que non sexa madeira.O punto de rotura está a uns 3 cm da parte superior da cabeza do hisopo, o que é fácil de romper.

O CDC nos Estados Unidos tamén mencionou "Use só hisopos de fibra sintética con eixes de plástico ou arame.Non use hisopos de alxinato de calcio ou hisopos con eixos de madeira,xa que poden conter substancias que inactivan algúns virus e inhiben as probas de PCR.

Actualmente moi utilizado é un cotonete de nailon estéril desbotable combinado cunha varilla de plástico.O cotonete de flocado ten unha mellor absorción de auga e taxa de liberación.Segundo os diferentes lugares de mostraxe, a cabeza do cotonete tamén ten diferentes tamaños e fibras.O grosor.”

3. Solución de conservación do transporte de mostra

Solución de preservación da inactivación do virus: unha cantidade adecuada de concentración de sal de guanidina e unha variedade de compoñentes de lise do virus poden lisar directamente o virus para liberar ácido nucleico, inactivar a RNase e ADNase e garantir a integridade do ácido nucleico, que se pode usar para a detección posterior de qPCR.Non se pode usar para o cultivo e illamento de virus.

Solución de transporte e conservación do virus: contén sales, aminoácidos, vitaminas, glicosa e proteínas necesarias para a supervivencia do virus, que poden manter a actividade do virus.Pódese usar para a extracción de ácidos nucleicos e a detección do virus no futuro, e tamén se pode usar para o cultivo e separación do virus.

4. Tubo de conservación da mostra e bolsa de mostras

O tubo de almacenamento da mostra debe ser un tubo de plástico estéril cunha tapa de rosca que non adsorba ácido nucleico.Cada tubo de mostra debe estar cuberto cunha bolsa de mostra para evitar fugas e contaminación da mostra.

III.Substancias interferentes na mostra

Substancias interferentes en experimentos de PCR

1. interferente endóxeno

As substancias presentes na mostra corporal poden interferir coa detección doutras substancias.

Sangue:hemo (> 1 mg/ml), hemina (> 0,1 ng/μl), triglicéridos, IgG, etc.;

ouriños:urea (20 mM);

Taburete:polisacáridos vexetais, colato;

Tecido:protease, coláxeno;

Leite: protease, ión calcio;

Drogas: antibióticos, antivirais, hormonas, etc.

outra.

2. interferente esóxeno

Procede de substancias que poden interferir coa detección doutras substancias in vitro.Aditivos para mostras e substancias que se poden poñer en contacto durante a recollida e procesamento da mostra:

Material de proba: xel de separación de soro, recipiente de recollida de mostras e tapón de goma, catéter, fluído de lavado de catéteres, luvas en po, etc.

Anticoagulante: heparina (>0,1 U/ml), EDTA (>0,5 mM), etc.;

Disolventes orgánicos: isopropanol (>0,1 UI/ml), betaína, dimetilsulfóxido, formamida, glicerina, PEG, etc.;

Desinfectantes: alcohois (etanol>1%), aldehídos, fenois (fenol>0,2%), peróxidos, ácidos fortes (HCL), álcalis fortes (NaOH), etc.;

Deterxente:SDS (>0,005%);

Solo: Humus

Colorante: Indigo

outra.

En condicións reais de mostraxe ao aire libre, como a recollida de mostras ambientais, as mostras poden conter unha variedade de substancias interferentes e a composición das substancias interferentes en cada lugar é diferente, o que require que se realicen experimentos de interferencia de PCR segundo as condicións locais.

IV.Condicións de almacenamento e transporte da mostra

As mostras clínicas recentemente recollidas deben enviarse ao laboratorio nun prazo de 2 a 4 horas despois da recollida a unha temperatura de 2 °C a 8 °C.Almacenar a 4 ℃ en 24 horas.As mostras utilizadas para o illamento de virus e a detección de ácidos nucleicos deben ser probadas o antes posible.As mostras que se poden probar en 24 horas pódense almacenar a 4 °C;As mostras que non se poden detectar nun prazo de 24 horas deben almacenarse a -70 °C ou menos (se non, conservar a 70 °C nun frigorífico a -20 °C).

Resumo:A recollida, o transporte e o almacenamento normalizados das mostras son esenciais para as probas posteriores.Os falsos negativos de moitas probas de laboratorio son causados ​​pola recollida, transporte e almacenamento inadecuados de mostras que conducen á degradación do ácido nucleico viral.Non obstante, moitos laboratorios aínda ignoran a importancia da toma de mostras.Espero que este artigo poida espertar a atención de todos sobre a mostraxe e facer unha mostra máis científica e razoable.

Produto relacionado:

Kit de detección de ácido nucleico variante SARS-CoV-2 (I) (método de sonda fluorescente de PCR múltiple)-para detección de mutantes de Brasil, Sudáfrica e Reino Unido