Canto sabes

Sobre Nextracción de ácido ucleico

O inicio e o final do ácido nucleico purificado

Todo é difícil ao principio, o ácido nucleico purificado é o máis

Iniciación de experimentos moleculares, para experimentos posteriores

O éxito ou o fracaso teñen un impacto crucial.

Moitos investigadores científicos prefiren o espectrofotómetro UV de traza/ultratraza porque pode detectar a concentración de ácidos nucleicos e os residuos de proteínas e ións salinos de forma sinxela, rápida e económica.

Como todos sabemos, A260 significa valor OD de absorbancia de ácido nucleico, A280 significa valor OD de absorbancia de concentración de proteínas, A230 significa valor OD de absorbancia de concentración de ión salino, polo que A260 pode converter a concentración de ácido nucleico, A260/280 significa residuo de proteína, A260/230 significa residuo de ión salino, pero esta é só unha regra baseada nunha gran investigación baseada nunha regra.convencional” crer que pode explicar a pureza do ADN e do ARNen certa medida.Non é o único estándar para a identificación do rendemento e pureza do ácido nucleico, só se usa como referencia e non é un "patrón de ouro".

O manual do Thermo Fisher ND-2000 enfatiza a fiabilidade dos resultados das probas

O motivo é que os resultados obtidos mediante o uso dun espectrofotómetro UV micro/ultramicro só reflicten o rendemento e a pureza do ácido nucleico desde o lado, e hai moitos factores que inflúen (vía óptica, volume da mostra, concentración da mostra, valor de pH, outros ións que afectan a medición da absorbancia, etc.), o valor de DO medido non é necesariamente preciso.Ao mesmo tempo, debido á falta de especificidade do material de determinación do valor de absorbancia, o ADN monocatenario, o ADN de dobre cadea, o ARN, os dNTPs e algunhas proteínas teñen picos de absorción a unha lonxitude de onda de 260 nm, e a concentración determinada só por A260 non é necesariamente o ADN ou ARN real.Non se pode xulgar a concentración, a súa integridade e degradación.

Entón, como xulgar a calidade do noso ácido nucleico purificado?Ademais de utilizar un espectrofotómetro UV micro/ultramicro para a detección, tamén se requiren métodos como a electroforese en xel de agarosa para mostrar visualmente a pureza e integridade do ácido nucleico e indicar a concentración ata certo punto.Deste xeito, o rendemento de ácido nucleico e a pureza obtidos a partir dos resultados da detección de varios métodos son cribles.

Comparación de gráficos experimentales

O ADN xenómico das células H1299 foi extraído usando os kits de extracción de ADN da empresa A, e observouse unha contaminación significativa por impurezas, o que resultou en altos valores de DO.

(Valor de medición DO e electroferograma correspondente)

Índice de avaliación

Existe un "patrón de ouro" para o rendemento de ácidos nucleicos e as probas de calidade?

Polo que sabemos, non existe un método sinxelo, rápido e barato.Tanto se se trata de espectrofotómetro, electroforese en xel ou espectrometría de masas, todos reflicten a concentración e pureza do ácido nucleico na disolución desde diferentes aspectos, e deben ser xulgados facendo referencia entre si.

O mellor índice de avaliación é semprea aplicación experimental de seguimento.Non afecta a eficiencia da transcrición inversa e da amplificación por PCR.A obtención de produtos de amplificación e valores de Ct fiables e a obtención dunha secuencia completa mediante a secuenciación é unha extracción exitosa de ácidos nucleicos.

En resumo, o punto de vista da teoría de só proporción debería ser cuestionado pola visión de "utilizar bos resultados experimentais posteriores como bos parámetros de extracción"!

Kits de extracción de ARN de ADN Foregene recomendados para obter unha pureza elevada de ADN/ARN:

https://www.foreivd.com/reagent/dna-isolation-series/

https://www.foreivd.com/reagent/rna-isolation-series/