Establecer un SOP do experimento de PCR para estandarizar o comportamento do persoal do experimento.
O experimentador cumpre estritamente os procedementos operativos e minimiza a contaminación por PCR que pode ser causada por factores humanos ou evita a aparición de contaminación.Ademais, o experimentador debe ter os coñecementos e habilidades profesionais correspondentes, incluíndo a competencia para manexar equipos relacionados, aclarar todo o proceso de traballo, dominar os métodos de tratamento da contaminación e os métodos de control de calidade do laboratorio, e ser capaz de interpretar correctamente os resultados das probas.
Establecer un laboratorio de PCR estándar.
O laboratorio de PCR divídese en catro áreas, en principio, a saber: área de preparación de reactivos, área de procesamento de mostras, área de amplificación e área de análise de produtos de amplificación.As dúas primeiras áreas son áreas de pre-amplificación, e as dúas últimas áreas son áreas de post-amplificación.A zona de pre-amplificación e a zona de post-amplificación deben estar estrictamente separadas.Os materiais experimentais, reactivos, papel de rexistro, bolígrafos, materiais de limpeza, etc., só poden fluír desde a zona de pre-amplificación á área de post-amplificación, é dicir, desde a zona de preparación de reactivos → área de procesamento da mostra → área de amplificación → área de análise de produtos de amplificación, e non deben fluír cara atrás.O fluxo de aire no laboratorio tamén debe fluír dende a zona de pre-amplificación ata a zona de posterior a amplificación, e non fluír cara atrás.O deseño ideal do laboratorio de PCR móstrase a continuación:
Figura A: Modo ideal de configuración do laboratorio de PCR con presión negativa na sala de tampón
Figura B: Modo de configuración de laboratorio de PCR ideal con presión positiva na sala de tampón
Os diagramas de configuración do laboratorio de PCR que aparecen na Figura A e na Figura B deberían ser un modo de configuración máis ideal, e o laboratorio con condicións pode referirse a este modo para o deseño.Para os laboratorios normais, recoméndase que a área de amplificación da PCR e a área de análise do produto se poidan separar, e a apertura da tapa debe reducirse o máximo posible na área de preparación da mostra e na área de amplificación da PCR.Lembra: Queda terminantemente prohibido levar produtos e materiais experimentais na área de análise de produtos á área de preparación da mostra e á área de amplificación da PCR.
Se o laboratorio só realiza a detección e identificación por PCR, recoméndase utilizar a PCR cuantitativa fluorescente en lugar da PCR convencional.
Os resultados da detección cuantitativa da PCR de fluorescencia pódense recoller e analizar mediante sinais de fluorescencia, polo que non hai necesidade de abrir a tapa para a electroforese despois da reacción, o que evita a contaminación do produto da PCR causada pola fuga de produtos de reacción para formar aerosois.Se aumenta o número de aberturas de tapa durante a etapa de carga da electroforese en xel, é probable que se produza contaminación por aerosol.Recoméndase promover a aplicación da PCR cuantitativa e substituír gradualmente a PCR cualitativa.
O sistema de contaminación de produtos anti-PCR UNG úsase para a reacción de PCR.
O sistema usa dUTP en lugar de dTTP.Despois da reacción de PCR, todos os produtos de PCR (fragmentos de ADN) incorpóranse con dUTP;na seguinte rolda de reacción de PCR, o encima UNG engadido ao sistema incúbase a 37 °C durante 5 minutos antes da PCR, que pode degradar especificamente todos os fragmentos de ADN que conteñan dUTP, e despois realizar a reacción de PCR.Isto pode eliminar completamente a contaminación do aerosol causada polos produtos de PCR.O efecto móstrase na seguinte figura:
Nota: para a serie PCR directa, pode escoller os produtos da serie do sistema de contaminación de produtos anti-PCR de ForegeneSuxerir
Para os laboratorios que realizan probas de xenotipado a gran escala, recoméndase encarecidamente utilizar o sistema de contaminación de produtos anti-PCR UNG para probar reactivos ademais da construción de laboratorios razoables.
Recordatorio: o uso deste sistema non pode eliminar a contaminación do produto PCR que xa foi causada.Polo tanto, o sistema UNG debe usarse ao comezo da proba relevante e o sistema UNG debe usarse para a amplificación da PCR, para evitar a contaminación dos produtos de PCR Falso positivo.
Recoméndase utilizar o sistema Direct PCR-UNG de Foregene cando se realicen probas a gran escala, como:
Plant Leaf Direct PCR Kit-UNG;
Plant Seed Direct PCR Kit-UNG;
Kit de PCR directa de tecido animal-UNG;
Mouse Tail Direct PCR Kit-UNG;
Zebra Fish Direct PCR Kit-UNG.
Esta serie de kits de ForegeneNon só pode realizar a detección por PCR de forma rápida e a gran escala, senón que tamén pode previr e controlar de forma eficaz a contaminación dos produtos da PCR.
Hora de publicación: 19-mar-2021
