1: Substitúe os materiais experimentais a tempo

Configure o control negativo (NTC) e repíteo moitas veces.Unha vez que se comprobe que hai contaminación do produto de PCR no laboratorio, substitúa todos os materiais experimentais a tempo.Tales como: volver a diluír e preparar os cebadores, volver a esterilizar a punta da pipeta, o tubo EP, ddH2O, etc., substituír por unha pipeta nova e tomar en préstamo temporalmente outros laboratorios para realizar experimentos de PCR.O laboratorio contaminado ventilarase e irradiarase con raios ultravioleta ata que se elimine a contaminación do produto da PCR antes de continuar co experimento.

2: Estender o tempo de exposición UV

Paga a pena notar que para eliminar a contaminación do ADN, a radiación ultravioleta regular debe prolongarse 2 horas do habitual.Aínda así, o efecto da irradiación UV na eliminación de pequenos fragmentos (por debaixo de 200 pb) de contaminación do ADN aínda non é bo.

A lonxitude de onda ultravioleta (nm) é xeralmente de 254/300 nm, e é suficiente para irradiar durante 30 minutos.Nótese que ao elixir UV para eliminar a contaminación dos produtos de PCR residuais, débese considerar a lonxitude do produto de PCR e a distribución das bases na secuencia do produto.A irradiación UV só é eficaz para fragmentos longos superiores a 500 pb, e ten pouco efecto en fragmentos curtos.

Durante a irradiación UV, as bases de pirimidina no produto da PCR formarán dímeros.Estes dímeros poden terminar a extensión, pero non todas as pirimidinas da cadea de ADN poden formar dímeros, e a irradiación UV tamén pode romper os dímeros..O grao de formación do dímero depende da lonxitude de onda UV, do tipo de dímero de pirimidina e da secuencia de nucleótidos adxacentes ao sitio do dímero.Polo tanto, se os fragmentos amplificados por PCR son pequenos, recoméndase utilizar o sistema de contaminación de produtos anti-PCR UNG.

3: Eliminadores de contaminación de ADN de uso común

Os aerosois xéranse facilmente cando se engaden pipetas, o que é difícil de evitar, e sedimentarase rapidamente.Polo tanto, é sen dúbida unha boa opción usar con frecuencia depuradores especiais de contaminación por ADN para evitar a propagación da contaminación por ADN.

4: Use o sistema anticontaminación UNG

Despois de eliminar a contaminación do produto PCR, o laboratorio de probas pode utilizar o sistema de contaminación do produto anti-PCR UNG para evitar a contaminación do produto PCR.Nos laboratorios xerais, pode realizar particións experimentais sinxelas, separar estritamente a área de produtos da PCR doutras áreas, establecer determinadas regras e regulamentos de laboratorio e realizar a formación pertinente para evitar a aparición de contaminación do produto PCR.

Recomendacións: establecer un laboratorio de PCR razoable, manter un bo ambiente de PCR, formular procedementos operativos estándar de PCR e cultivar a conciencia operativa rigorosa dos experimentadores son as claves para previr ou reducir a contaminación dos experimentos de PCR.