W: Irmán, complétase a transcrición inversa e, finalmente, o último paso: a PCR cuantitativa fluorescente!Ola, irmán, que é a PCR cuantitativa en tempo real?
M: PCR sempre o sabes, non?
W: Xa sabes, a PCR é a reacción en cadea da polimerase, e é unha tecnoloxía que aumenta o ADN.
M: É case... É un método técnico para amplificar a secuencia diana a máis dun millón de veces a través de cebadores específicos, pero isto só indica a presenza ou ausencia da secuencia diana e non pode determinar a cantidade da plantilla inicial.A PCR cuantitativa de fluorescencia é un método técnico desenvolvido para resolver este problema.A PCR en tempo real e a PCR en cantidade (qPCR) fan referencia xeralmente a ela.
W: A diferenza coa PCR común reside na cuantificación de fluorescencia?
M: Si, é dicir, na fase de extensión de cada ciclo de PCR, detéctase a intensidade do sinal de fluorescencia e pódese calcular a cantidade inicial do modelo segundo o cambio da intensidade do sinal.
W: Parece tan complicado!Teño que calculalo por min mesmo?
M: Isto require que aprendas lentamente, o mellor é poder entender o principio.Agora podes centrarte primeiro no valor CT, que son datos experimentais relativamente intuitivos, e o seu tamaño corresponde ao tamaño da cantidade inicial do modelo.Tamén hai gráficos como curvas de amplificación e curvas de fusión.Eles teñen a última palabra sobre se o teu experimento ten éxito ou non.
W: Ai, irmán.Entón vou facer o experimento qPCR!
M: Preste especial atención a non engadir modelos á área de reactivos, se non, a súa mestura non utilizada contaminarase facilmente.
W: Entendido!

Real Time PCR Easyᵀᴹ-SYBR Green I Kit

Maior eficiencia, maior especificidade
Alta sensibilidade, boa compatibilidade