A seguinte análise dos posibles problemas enBucalhisopo/TLC card DNA extraction is helpful to your experiment. In addition, for other experimental or technical problems in addition to operating instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us at: 028-83360257 or E-mali:Tech@foregene.com.

A columna de purificación está obstruída

Neste kit, na operación de extracción de ADN xenómico, a columna de purificación adórbese directamente na mestura de lise enzimática da mostra sen etapa de centrifugación e a columna de purificación pode bloquearse debido á enzima incompleta e á alta viscosidade da mostra.

As seguintes causas posibles son as seguintes:

1. Dixestión enzimática incompleta de mostras de tecido.

Recomendación: o tempo de procesamento da mostra da Protease Foregene pódese ampliar adecuadamente ou o sobrenadante pódese tomar despois da centrifugación a 12.000 rpm (~13.400 rpm).× g) durante 5 min.

2. Uso excesivo de mostras de tecidos ou grandes tecidos.

Recomendación: é mellor non superar 1Bucal cotonete na mostra;se a mostra é demasiado grande, aumente a dosificación de Buffer ST1, Foregene Protease, tampón ST2 en consecuencia.

3. A viscosidade da mostra é demasiado alta.

Recomendación: as mostras pódense diluír adecuadamente con 10 mM de Tris-HCl antes da extracción do ADN xenómico.

4. Succionáronse fragmentos da tarxeta de sangue.

Recomendación: o tempo de centrifugación transitoria do paso 6 da extracción xenómica de manchas de sangue (tarxeta FTA) pódese ampliar adecuadamente.

Baixo rendemento ou sen ADN

Moitas veces hai unha variedade de factores que afectan o rendemento do ADN xenómico, incluíndo a orixe da mostra, as condicións de almacenamento da mostra, a preparación da mostra, a manipulación, etc.

Non se pode obter ADN xenómico durante a extracción

As posibles causas son as seguintes:

1. A conservación inadecuada das mostras ou o almacenamento durante demasiado tempo conduce á degradación do ADN xenómico.

Recomendación: os hisopos orais deben ser tomados de preferencia recentemente, e non é recomendable o uso de hisopos conservados para as operacións de extracción de ADN xenómico;As mostras de manchas de sangue deben garantir que a calidade sexa cualificada e que o tempo de almacenamento non sexa demasiado longo.

2. O uso de tecido moi reducido pode provocar que non se extraiga o ADN xenómico correspondente.

Recomendación: Siga obuccal instrucións de mostraxe de cotonete na guía de operación e limpe tantas veces como sexa posible para que se poidan unir suficientes células ao cotonete oral para a extracción de ADN xenómico;para a extracción de mostras de manchas de sangue, a área de corte de manchas de sangue pódese aumentar adecuadamente.

3. A protease do xene anterior consérvase de forma incorrecta, o que provoca unha diminución da súa actividade ou a súa inactivación.

Recomendación: Confirmar as condicións de almacenamento deo Foregene Protease ou substitúea por unha nova Foregene Protease para a reacción enzimática.

4. A conservación inadecuada do kit ou o tempo de almacenamento é demasiado longo, o que provoca o fallo dalgúns compoñentes do kit.

Recomendación: mercar un novoBucal hisopo de ADNillamento kit para procedementos relacionados.

5. O tampón WB non engade etanol absoluto.

Recomendación: Confirme que o tampón WB engade o volume correcto de etanol absoluto.

6. O eluyente non se engade correctamente á película de silicona.

Recomendación: Engadir 65°Co eluyente prequentado cae ao medio da membrana de silicona e déixase a temperatura ambiente durante 5 minutos para aumentar a eficiencia de elución.

LADN xenómico de baixo rendemento illado

As seguintes causas posibles son as seguintes:

1. A conservación inadecuada das mostras ou o almacenamento durante demasiado tempo conduce á degradación do ADN xenómico.

Recomendación: os hisopos orais son preferiblemente mostrados recentemente, e os hisopos conservados non se deben usar para a extracción de ADN xenómico.

2. Se a cantidade de mostra de tecido é demasiado pequena, o contido de ADN xenómico extraído será menor.

Recomendación: siga as instrucións de toma de mostras de cotonete oral da guía de operación, limpando tantas veces como sexa posible para que se poidan unir ao cotonete o coiro suficiente para a extracción de ADN xenómico.

3. A protease do xene anterior consérvase de forma incorrecta, o que provoca unha diminución da súa actividade ou a súa inactivación.

Recomendación: Confirmar as condicións de almacenamento dethe Foregene Protease ou substituílo por un novo Foregene Protease para reacción enzimática.

4. Problemas de eluentes.

Recomendación: utilizar tampón EB para a elución;se usa ddH₂O ou outros eluentes, confirme que o pH do eluato está entre 7,0-8,5.

5. O eluato non se engade correctamente gota a gota.

Recomendación: Engadir gotas de eluyente ao medio da membrana de silicona e deixar a temperatura ambiente durante 5 minutos para aumentar a eficiencia de elución.

6. O líquido de elución acumúlase demasiado pouco.

Recomendación: use o eluyente para a elución de ADN xenómico tal e como se require nas instrucións, polo menosnada menos que 15μl.

Lque pureza of ADN xenómicoillado

A baixa pureza do ADN xenómico pode provocar un fracaso ou resultados insatisfactorios dos experimentos posteriores, como: as encimas non se poden abrir, a PCR non pode obter o fragmento xenético de interese, etc.

As posibles causas son as seguintes:

1. Contaminación por heteroproteínas, contaminación por ARN.

Análise: a columna de purificación non se lavou usando Buffer PW;a columna de purificación de lavado Buffer PW non se lavou usando a velocidade centrífuga correcta.

Recomendación: Asegúrese de que non haxa precipitación no sobrenadante antes de engadir etanol;asegúrese de lavar a columna de purificación segundo as instrucións e non se pode omitir este paso.

2. Contaminación por ións impuros.

Análise: Omitiuse a columna de purificación de lavado de tampón WB ou lavouse só unha vez, o que provocou contaminación iónica residual.

Recomendación: asegúrate de lavar o Buffer WB 2 veces segundo se indica para eliminar o máximo posible os ións residuais.

3. Contaminación por encimas de ARN.

Análise: engadíronse RNases estranxeiras ao tampón;A operación de lavado do tampón PW foi incorrecta, o que deu lugar a residuos de RNase, que afectaron as operacións experimentais de ARN posteriores, como a transcrición in vitro.

Recomendación: ácido nucleico da serie ForegeneillaOs kits de tratamento poden eliminar ARN sen adición adicional de RNase,así Kit de illamento de ADN de hisopo bucal/tarxeta FTAnecesario't engadir RNase;asegúrese de seguir as instrucións para a columna de purificación de lavado Buffer PW, e este paso non se pode omitir.

4. Residuo de etanol.

Análise: o tampón WB non realizou a centrifugación en tubo baleiro despois de lavar a columna de purificación.

Recomendación: Realice a correcta operación de centrifugación en tubo baleiro segundo as instrucións.

5. Outra contaminación por impurezas.

Análise: as mostras gardadas ou as mostras especiais non se tratan previamente.

Recomendación: pretratar a mostra a fondo segundo se indica.