Kit de illamento de ADN e ARN viral Kits de preparación de purificación de extracción de ADN e ARN viral
Especificacións
50 preparacións, 200 preparacións
O kit de illamento de extracción de purificación de ácido nucleico de ARN viral utiliza a columna de spin e a fórmula desenvolvidas por Foregene, que pode extraer de forma eficiente ARN viral de alta pureza e calidade de mostras como plasma, soro, fluído corporal sen células e sobrenadante de cultivo celular.O kit engade específicamente acrilamida lineal, que pode capturar facilmente pequenas cantidades de ARN das mostras.A columna ARN-Only pode unir o ARN de forma eficiente.O kit pode procesar un gran número de mostras ao mesmo tempo.
O kit completo non contén RNase, polo que o ARN purificado non se degradará.Buffer viRW1 e Buffer viRW2 poden garantir que o ácido nucleico viral obtido libre de proteínas, nuclease ou outras impurezas, que se poden usar directamente para experimentos de bioloxía molecular posteriores.
Compoñentes do kit
| Acrilamida lineal |
| Tampón DRL |
| Tampón RW1, Tampón RW2 |
| DdH libre de RNase2O |
| Columna ADN/ARN |
| Instrucións |
Características e vantaxes
■ Funcionamento a temperatura ambiente (15-25 ℃) durante todo o proceso, sen baño de xeo e centrifugación a baixa temperatura.
■ Kit completo sen RNase, non hai que preocuparse pola degradación do ARN.
■ Alto rendemento de ácidos nucleicos: A columna só de ADN/ARN e a fórmula única poden purificar ADN e ARN de forma eficiente.
■ Gran capacidade de procesamento de mostras: pódense procesar mostras de ata 200μl cada vez.
■ Velocidade rápida: fácil de operar e pódese completar en 20 minutos.
■ Seguridade: non se precisa ningún reactivo orgánico.
■ Alta calidade: os fragmentos de ARN purificados son de gran pureza, están libres de proteínas e outras impurezas e poden satisfacer varias aplicacións experimentais posteriores.
Aplicación do kit
É axeitado para a extracción e purificación de ácido nucleico viral en mostras como plasma, soro, fluído corporal libre de células e sobrenadante de cultivo celular.
Fluxo de traballo
Diagrama
Almacenamento e vida útil
■ Este kit pódese almacenar durante 24 meses en condicións secas a temperatura ambiente (15-25 ℃);se precisa almacenarse durante máis tempo, pódese almacenar entre 2 e 8 ℃.
■ A solución de acrilamida lineal pódese almacenar a temperatura ambiente durante 7 días;despois de recibir o kit, sácao e gárdao a -20 °C.
■ Despois de engadir a acrilamida lineal ao buffer DRL, pódese almacenar a 2-8 °C ata 48 h.Use a solución preparada.
Guía de análise de problemas
A continuación móstrase unha análise dos problemas que se poden atopar na extracción de ADN/ARN viral, coa esperanza de ser útiles para os seus experimentos.Ademais, para outros problemas experimentais ou técnicos que non sexan as instrucións de funcionamento e a análise de problemas, temos soporte técnico dedicado para axudarche.Se tes algunha necesidade, póñase en contacto connosco: 028-83360257 ou correo electrónico:
Tech@foregene.com.
Sen extracción de ácido nucleico ou baixo rendemento de ácido nucleico
Adoitan existir moitos factores que afectan á eficiencia da recuperación, tales como: contido de ácido nucleico da mostra, método de operación, volume de elución, etc.
Análise de causas comúns:
1. Durante o procedemento realizouse un baño de xeo ou centrifugación a baixa temperatura (4 °C).
Suxestión: Operar a temperatura ambiente (15-25 °C) durante todo o proceso, non baño con xeo e centrifugación a baixa temperatura.
2. A mostra almacenouse de forma incorrecta ou a mostra almacenouse durante moito tempo.
Recomendación: almacene as mostras a -80 °C e evite conxelacións e desconxelacións repetidas;intente utilizar mostras recén recollidas para a extracción de ácidos nucleicos.
3. Lise da mostra insuficiente.
Recomendación: asegúrese de que a mostra e a solución de traballo de lise estean ben mesturadas e incubadas a temperatura ambiente (15-25 °C) durante 10 minutos.
4. Adición incorrecta de eluyente.
Suxestión: asegúrese de que se engade gota a gota ddH2O sen RNase ao medio da membrana da columna de purificación e non o deixe caer no anel da columna de purificación.
5. Non se engadiu o volume correcto de etanol absoluto ao tampón RW2.
Suxestión: siga as instrucións, engada o volume correcto de etanol absoluto ao tampón RW2 e mestura ben antes de usar o kit.
6. Volume de mostra inadecuado.
Suxestión: 200 µl de mostra son procesados por cada 500 µl de Buffer DRL.O procesamento excesivo da mostra producirá un menor rendemento de extracción de ácidos nucleicos.
7. Volume de elución inadecuado ou elución incompleta.
Recomendación: o volume de eluyente da columna de purificación é de 30-50μl;se o efecto de elución non é satisfactorio, recoméndase prolongar o tempo a temperatura ambiente despois de engadir ddH2O sen RNase precalentado, como 5-10 min.
8. O etanol permanece na columna despois do lavado con Tampón RW2.
Suxestión: se o etanol permanece despois da centrifugación con Buffer RW2 durante 2 minutos, a columna pódese colocar a temperatura ambiente durante 5 minutos despois da centrifugación para eliminar completamente o etanol residual.
O ácido nucleico purificado é degradado
A calidade do ácido nucleico purificado está relacionada coa conservación da mostra, a contaminación por RNase, o funcionamento e outros factores.Análise de causas comúns:
1. As mostras recollidas non foron almacenadas a tempo.
Suxestión: se a mostra non se utiliza a tempo despois da recollida, almacénaa inmediatamente a -80 °C a baixa temperatura.Para a extracción de ARN, intente utilizar mostras recén recollidas.
2. Recoller mostras e conxelar e desconxelar repetidamente.
Suxestión: Evitar a conxelación e desconxelación (non máis dunha vez) durante a recollida e almacenamento das mostras, se non, o rendemento de ácido nucleico reducirase.
3. A RNase introdúcese no quirófano ou non se levan luvas desbotables, máscaras, etc.
Recomendación: os experimentos de extracción de ARN realízanse mellor nunha sala de operacións de ARN separada e a mesa do laboratorio debe limparse antes do experimento.
Use luvas e máscaras desbotables durante o experimento para evitar na maior medida a degradación do ARN causada pola introdución de RNase.
4. O reactivo estivo contaminado con RNase durante o seu uso.
Recomendación: Substitúeo por un novo kit de illamento de ADN/ARN viral para experimentos relacionados.
5. Os tubos de centrífuga e as puntas das pipetas utilizados para a manipulación do ARN están contaminados con RNase.
Suxestión: asegúrese de que os tubos de centrífuga, puntas de pipeta, pipetas, etc. utilizados para a extracción de ARN estean todos libres de RNase.
O ácido nucleico purificado afecta os experimentos posteriores
ADN e ARN purificados pola columna de purificación, se o contido de ión de sal e proteína é demasiado alto, afectará aos experimentos posteriores, como: amplificación por PCR, transcrición inversa, etc.
1. O ADN e o ARN eluídos teñen ións salinos residuais.
Suxestión: asegúrese de que se engade o volume correcto de etanol absoluto ao tampón RW2 e lave a columna de purificación dúas veces á velocidade de centrifugación especificada nas instrucións de funcionamento;Realice a centrifugación para minimizar a contaminación por ións de sal.
2. O ADN e o ARN eluídos teñen residuos de etanol.
Suxestión: Despois de confirmar o lavado con Buffer RW2, realice a centrifugación en tubo baleiro á velocidade de centrifugación das instrucións de funcionamento;se aínda queda residuo de etanol, pode centrifugar o tubo baleiro e despois colocalo a temperatura ambiente durante 5 minutos para eliminar o residuo de etanol na maior medida.
Manuais de instrucións:
Manual de instrucións do kit de illamento de ADN e ARN viral
