Guía de análise de problemas

The following is an analysis of the problems that may be encountered in the extraction of plant genomic DNA, hoping to be helpful to your experiments. In addition, for other experimental or technical problems other than operation instructions and problem analysis, we have dedicated technical support to help you. If you have any needs, please contact us: 028-83360257 or E-mali: Tech@foregene.com.

Baixo rendemento ou sen ADN

Normalmente hai moitos factores que afectan o rendemento de ADN xenómico, incluíndo a fonte da mostra, a idade da mostra, as condicións de almacenamento da mostra e o funcionamento.

Non se puido obter o ADN xenómico durante a extracción

1. As mostras de tecidos almacénanse de forma inadecuada ou almacénanse durante demasiado tempo, o que provoca a degradación do ADN xenómico.

Recomendación: almacenar as mostras de tecido en nitróxeno líquido ou -20°C;intente utilizar mostras recentemente recollidas para a extracción de ADN xenómico.

2. Unha cantidade de mostra moi pequena pode provocar que non se extraiga o ADN xenómico correspondente.

Suxestión: para as mostras de tecido que se almacenaron durante moito tempo ou teñen unha grave degradación do ADN xenómico, a cantidade de mostras de tecido pode aumentarse adecuadamente para extraer ADN xenómico considerable.A cantidade da mostra pódese determinar segundo as necesidades de ADN, pero a mostra fresca non debe exceder os 100 mg e a mostra seca non debe exceder os 30 mg.

3. A mostra non se moe con nitróxeno líquido nin se coloca durante moito tempo despois do nitróxeno líquido.

Suxestión: durante a extracción de ADN, a mostra necesita ser completamente moída con nitróxeno líquido para romper a parede celular;despois de moer, transfira a mostra en po a PL1 prequentado a 65°C canto antes (unha vez que o po moído se derrita, o ADN xenómico comezará a degradarse rapidamente).

4. O almacenamento inadecuado da Protease Foregene produce unha actividade reducida ou inactivada.

Recomendación: confirme as condicións de almacenamento da Protease Foregene ou substitúea por unha nova Protease Foregene para a hidrólise enzimática.

5. O kit está mal almacenado ou almacenado durante moito tempo, o que fai que algúns compoñentes do kit fallen.

Recomendación: mercar un novo kit de extracción de ADN xenómico de plantas para operacións relacionadas.

6. Uso indebido do kit.

Suxestión: Adquirir un kit de illamento de ADN vexetal dedicado a mostras para a extracción e purificación de ADN xenómico vexetal.

7. Buffer WB sen engadir anhidro etanol.

Recomendación: Asegúrese de engadir o volume correcto de etanol absoluto ao Buffer WB.

8. O eluyente non se pintou correctamente sobre a membrana de sílice.

Suxestión: Engadir o eluyente prequentado a 65℃gota a gota ata o medio da membrana de xel de sílice e déixaa a temperatura ambiente durante 5 minutos para aumentar a eficiencia de elución.

Extracción para obter ADN xenómico de baixo rendemento

1. A mostra está mal almacenada ou almacenada durante moito tempo, o que provoca a degradación do ADN xenómico.

Recomendación: almacenar as mostras de tecido a -20℃;tentar utilizar mostras de tecidos recentemente recollidas para a extracción de ADN xenómico.

2. Se a cantidade de mostras de tecido é demasiado pequena, o ADN xenómico extraído será menor.

Suxestión: Algunhas mostras de plantas son ricas en auga, como plantas acuáticas como algas, etc., pódese aumentar a dosificación adecuadamente ou deshidratarse un pouco antes da operación.

3. As mostras non foron completamente moídas con nitróxeno líquido ou se deixaron a temperatura ambiente durante moito tempo despois da moenda.

Suxestión: a moenda de nitróxeno líquido debe ser suficiente e a parede celular da mostra debe romperse o máximo posible;inmediatamente despois da moenda, a mostra en po debe transferirse a 65℃Buffer PL1 precalentado para o seguinte paso.

4. Non utilizar o kit correcto.

Recomendación: use un kit de illamento de ADN vexetal dedicado para extraer e purificar o ADN xenómico das plantas.

5. O almacenamento inadecuado da Protease Foregene produce unha actividade reducida ou inactivada.

Recomendación: confirme as condicións de almacenamento da Protease Foregene ou substitúea por unha nova Protease Foregene para a hidrólise enzimática.

6. Problema dos eluentes

Recomendación: use Buffer EB para a elución;se usa ddH₂O ou outros eluentes, asegúrese de que o pH do eluyente estea entre 7,0 e 8,5.

7. O eluyente non se gotea correctamente

Suxestión: engade a gota de elución ao medio da membrana de sílice e déixaa a temperatura ambiente durante 5 minutos para aumentar a eficiencia de elución.

8. O volume de eluyente é demasiado pequeno

Suxestión: use o eluyente para a elución do ADN xenómico segundo as instrucións, polo menos non menos de 100μl.

ADN xenómico extraído con baixa pureza

A baixa pureza do ADN xenómico levará ao fracaso ou ao mal efecto dos experimentos posteriores, como: o encima non se pode cortar e o fragmento do xene diana non se pode obter mediante PCR.

1. Contaminación por proteínas varias, contaminación por ARN.

Análise: non se utilizou o tampón PW para lavar a columna;Non se utilizou o tampón PW para lavar a columna á velocidade de centrifugación correcta.

Suxestión: tentar asegurarse de que non haxa precipitación no sobrenadante cando o sobrenadante pasa pola columna;asegúrese de lavar a columna de purificación con Buffer PW segundo as instrucións, e este paso non se pode omitir.

2. Contaminación por ións impuros.

Análise: a columna de lavado Buffer WB foi omitida ou só se lavou unha vez, dando lugar a contaminación iónica residual.

Recomendación: Asegúrese de lavar dúas veces con Buffer WB segundo as instrucións para eliminar o máximo posible os ións residuais.

3. Contaminación por RNase.

Análise: RNase exóxena engádese ao tampón;A operación de lavado incorrecta no Buffer PW producirá RNase residual e afectará ás operacións experimentais de ARN posteriores, como a transcrición in vitro.

Suxestión: os kits de extracción de ácidos nucleicos da serie Foregene poden eliminar ARN sen RNase adicional e todos os reactivos do kit de illamento de ADN vexetal non precisan de RNase;asegúrese de lavar a columna de purificación con Buffer PW segundo as instrucións, e este paso non se pode omitir.

4. Residuos de etanol.

Análise: despois de lavar a columna de purificación con Buffer WB, non se realizou centrifugación en tubo baleiro.

Recomendación: Siga as instrucións para a centrifugación adecuada do tubo baleiro.

Manual de instrucións:

Manual de instrucións do kit de illamento do ADN das plantas