Chumbo
ARN longo non codificante, o lncRNA é un ARN non codificante cunha lonxitude superior a 200 nucleótidos, xeralmente entre 200-100000 nt.O lncRNA regula a expresión xénica a niveis epixenéticos, de transcrición e post-transcrición, e participa no silenciamento do cromosoma X, a impresión do xenoma e a modificación da cromatina, a activación da transcrición, a interferencia da transcrición, o transporte nuclear, a regulación do ciclo celular, a regulación da diferenciación celular e os efectos de compensación da dose (efecto de compensación da dose) e moitas outras enfermidades importantes que están relacionadas co desenvolvemento e regulación humana. os puntos quentes no campo da biomedicina.
01 Tipos e características do LncRNA
O lncRNA divídese en moitos tipos segundo as diferentes fontes da súa formación, como se mostra na figura anterior.Ten as seguintes características:
1. Os lncRNAs adoitan ser máis longos, con expresión dinámica e diferentes métodos de empalme durante a diferenciación
2. En comparación cos xenes codificantes, o lncRNA adoita ter un nivel de expresión inferior
3. A maioría dos lncRNAs teñen unha especificidade de expresión temporal e espacial evidente no proceso de diferenciación e desenvolvemento de tecidos
4. Hai expresións características en tumores e outras enfermidades
5. As localizacións subcelulares do lncRNA son diversas
6. A secuencia ten pouca conservación, pero a función ten un certo grao de conservación, etc.
02 Preguntas frecuentes sobre a transcrición inversa de LncRNA
Debido ao baixo contido de ARNlnc nas células, a súa longa lonxitude e a súa estrutura de alto nivel, este ARN adoita ter estruturas complexas como bucles de tronco ou forquillas, e a RT-qPCR é propensa a problemas de transcrición inversa sen éxito ou de baixa eficiencia.
03 Solución de transcrición inversa de LncRNA
Na regra central, o proceso dos virus de ARN que usan a súa propia transcriptase inversa para sintetizar ADN usando ARN como molde chámase transcrición inversa.O proceso de usar a transcriptase inversa do virus de ARN para sintetizar un molde de ADNc in vitro chámase transcrición inversa.Os principais elementos incluídos no sistema de transcrición inversa: plantilla de ARN, transcriptase inversa, cebadores e outros compoñentes.
1. Modelo de ARN
A influencia do molde de ARN na transcrición inversa reflíctese na súa estrutura, pureza e integridade.Canto maior sexa a pureza e integridade do ARN extraído, maior será a eficacia da transcrición inversa e máis precisos serán os resultados cuantitativos posteriores.O ARN purificado mediante reactivos de extracción de ARN de uso común contén a miúdo residuos de alcohol e sales de guanidina, que teñen un forte efecto inhibidor na maioría da transcriptase inversa.
2.Transcritase inversa
A transcriptase inversa ten unha influencia fundamental en todo o sistema de transcrición inversa.A temperatura adecuada para a transcriptase inversa utilizada na maioría dos laboratorios é xeralmente de 42 °C.De feito, a apertura da estrutura de ARN de alto nivel require unha temperatura máis alta, e os requisitos para a transcriptase inversa son maiores.
3.Primer
Os cebadores de transcrición inversa inclúen cebadores específicos de xenes, cebadores aleatorios e cebadores Oligo dT.A maioría dos lncRNAs non conteñen colas de poliA, e é importante facer coincidir correctamente os cebadores aleatorios con Oligo dT.
4.Outros compoñentes
Tendo en conta o feito de que o ARN é particularmente fácil de degradar, pódese minimizar a introdución de compoñentes no sistema de transcrición inversa, o que pode evitar eficazmente a entrada de RNase e garantir o bo progreso da transcrición inversa.
Forexenoobtén a partir do molde de ARN, a transcrición inversa a qPCR
Acompañe completamente a súa detección de lncRNA
ARN total animal IsolaciónKit (con columna de eliminación de gDNA)
ARN total celular IsolaciónKit (con columna de eliminación de gDNA)
Lnc-RT HeroTM I (Con gDNase) (Super Premix para a síntese de cDNA da primeira cadea a partir de lncRNA)
PCR en tempo real EasyTM-SYBR Green I
Avantaxes ofExtracción de ARN:
O kit usa a tecnoloxía de extracción de ARN de terceira xeración, sen necesidade de usar DNase.
11 minutos a partir de células cultivadas en placas de 96, 24, 12 e 6 pocillos, extracción de alta eficiencia de ARN celular total de alta pureza e de alta calidade sen gDNA.
Vantaxes da transcrición inversa do lncRNA:
Un sistema de transcrición inversa desenvolvido especialmente para o LncRNA para eliminar rapidamente a contaminación do ADN xenómico.
O sistema de transcrición inversa ten unha alta estabilidade térmica e aínda ten un bo rendemento de transcrición inversa a 50 °C.
Os modelos con alto contido de GC e estrutura secundaria complexa pódense reverter con alta eficiencia.
Vantaxesof qPCR:
Foregene Taq Polymerase de inicio en quente ten unha maior eficiencia de amplificación, maior sensibilidade de amplificación e maior especificidade de amplificación
O Real PCR Easy Mix optimizado fai que SYBR Green I teña unha maior sensibilidade de detección e a súa intensidade de fluorescencia é de 3-5 veces a de produtos similares, que poden satisfacer as necesidades de diferentes tipos de experimentos cuantitativos de fluorescencia.
Hora de publicación: 23-Xul-2021