• facebook
  • linkedin
  • youtube

Chumbo

ARN longo non codificante, o lncRNA é un ARN non codificante cunha lonxitude superior a 200 nucleótidos, xeralmente entre 200-100000 nt.O lncRNA regula a expresión xénica a niveis epixenéticos, de transcrición e post-transcrición, e participa no silenciamento do cromosoma X, a impresión do xenoma e a modificación da cromatina, a activación da transcrición, a interferencia da transcrición, o transporte nuclear, a regulación do ciclo celular, a regulación da diferenciación celular e os efectos de compensación da dose (efecto de compensación da dose) e moitas outras enfermidades importantes que están relacionadas co desenvolvemento e regulación humana. os puntos quentes no campo da biomedicina.

01  Tipos e características do LncRNA

noticias 723 (1)

O lncRNA divídese en moitos tipos segundo as diferentes fontes da súa formación, como se mostra na figura anterior.Ten as seguintes características:

1. Os lncRNAs adoitan ser máis longos, con expresión dinámica e diferentes métodos de empalme durante a diferenciación
2. En comparación cos xenes codificantes, o lncRNA adoita ter un nivel de expresión inferior
3. A maioría dos lncRNAs teñen unha especificidade de expresión temporal e espacial evidente no proceso de diferenciación e desenvolvemento de tecidos
4. Hai expresións características en tumores e outras enfermidades
5. As localizacións subcelulares do lncRNA son diversas
6. A secuencia ten pouca conservación, pero a función ten un certo grao de conservación, etc.

02 Preguntas frecuentes sobre a transcrición inversa de LncRNA

Debido ao baixo contido de ARNlnc nas células, a súa longa lonxitude e a súa estrutura de alto nivel, este ARN adoita ter estruturas complexas como bucles de tronco ou forquillas, e a RT-qPCR é propensa a problemas de transcrición inversa sen éxito ou de baixa eficiencia.

03 Solución de transcrición inversa de LncRNA

noticias 723 (2)

Na regra central, o proceso dos virus de ARN que usan a súa propia transcriptase inversa para sintetizar ADN usando ARN como molde chámase transcrición inversa.O proceso de usar a transcriptase inversa do virus de ARN para sintetizar un molde de ADNc in vitro chámase transcrición inversa.Os principais elementos incluídos no sistema de transcrición inversa: plantilla de ARN, transcriptase inversa, cebadores e outros compoñentes.

1. Modelo de ARN

A influencia do molde de ARN na transcrición inversa reflíctese na súa estrutura, pureza e integridade.Canto maior sexa a pureza e integridade do ARN extraído, maior será a eficacia da transcrición inversa e máis precisos serán os resultados cuantitativos posteriores.O ARN purificado mediante reactivos de extracción de ARN de uso común contén a miúdo residuos de alcohol e sales de guanidina, que teñen un forte efecto inhibidor na maioría da transcriptase inversa.

2.Transcritase inversa

A transcriptase inversa ten unha influencia fundamental en todo o sistema de transcrición inversa.A temperatura adecuada para a transcriptase inversa utilizada na maioría dos laboratorios é xeralmente de 42 °C.De feito, a apertura da estrutura de ARN de alto nivel require unha temperatura máis alta, e os requisitos para a transcriptase inversa son maiores.

3.Primer

Os cebadores de transcrición inversa inclúen cebadores específicos de xenes, cebadores aleatorios e cebadores Oligo dT.A maioría dos lncRNAs non conteñen colas de poliA, e é importante facer coincidir correctamente os cebadores aleatorios con Oligo dT.

4.Outros compoñentes

Tendo en conta o feito de que o ARN é particularmente fácil de degradar, pódese minimizar a introdución de compoñentes no sistema de transcrición inversa, o que pode evitar eficazmente a entrada de RNase e garantir o bo progreso da transcrición inversa.

Forexenoobtén a partir do molde de ARN, a transcrición inversa a qPCR

Acompañe completamente a súa detección de lncRNA

noticias 723 (3)

ARN total animal IsolaciónKit (con columna de eliminación de gDNA)

noticias 723 (4)

ARN total celular IsolaciónKit (con columna de eliminación de gDNA)

noticias 723 (5)

Lnc-RT HeroTM I (Con gDNase) (Super Premix para a síntese de cDNA da primeira cadea a partir de lncRNA)

noticias 723 (6)

PCR en tempo real EasyTM-SYBR Green I

Avantaxes ofExtracción de ARN:

O kit usa a tecnoloxía de extracción de ARN de terceira xeración, sen necesidade de usar DNase.

11 minutos a partir de células cultivadas en placas de 96, 24, 12 e 6 pocillos, extracción de alta eficiencia de ARN celular total de alta pureza e de alta calidade sen gDNA.

Vantaxes da transcrición inversa do lncRNA:

Un sistema de transcrición inversa desenvolvido especialmente para o LncRNA para eliminar rapidamente a contaminación do ADN xenómico.

O sistema de transcrición inversa ten unha alta estabilidade térmica e aínda ten un bo rendemento de transcrición inversa a 50 °C.

Os modelos con alto contido de GC e estrutura secundaria complexa pódense reverter con alta eficiencia.

Vantaxesof qPCR:

Foregene Taq Polymerase de inicio en quente ten unha maior eficiencia de amplificación, maior sensibilidade de amplificación e maior especificidade de amplificación

O Real PCR Easy Mix optimizado fai que SYBR Green I teña unha maior sensibilidade de detección e a súa intensidade de fluorescencia é de 3-5 veces a de produtos similares, que poden satisfacer as necesidades de diferentes tipos de experimentos cuantitativos de fluorescencia.


Hora de publicación: 23-Xul-2021